[发明专利]一种肝素钠的精制方法

说明书

技术领域

本发明涉及肝素钠的制备技术领域，尤其是一种肝素钠的精制方法。

背景技术

肝素钠是一种酸性黏多糖，具有抗凝血的作用。肝素钠作为一种天然抗凝血物质，在抗凝血、促进脂蛋白酶释放和补体溶细胞体系等方面具有良好的活性，广泛用于流行性脑炎、败血症、血栓塞、急性心肌梗塞、动脉硬化等治疗。

肝素钠的原料药来源于肝素粗品。肝素粗品源自健康动物的小肠粘膜，其中含有大量杂蛋白、杂核酸、微生物等，需经过物理和化学提取分离过程，定向获取天然结构基团完整的肝素，从而制成肝素钠原料药。

现有肝素提取纯化方法大多采用酸碱处理去除杂质蛋白、核酸等物质，采用多次氧化的方法去除色素类物质，采用乙醇多次分级的方式去除等杂多糖。上述酸碱处理的方式易造成核酸、色素的残留量高，导致后续氧化次数增多；酸处理及多次氧化易导致肝素钠部分失活，难以得到高效价的肝素钠；多次乙醇分级易造成收率降低及物料的浪费。

发明内容

本发明的发明目的在于：针对上述存在的问题，提供一种肝素钠的精制方法，该方法具有操作简单、工艺时间短，产品收率高的特点，并且所得产品光吸收率低，纯度高，活性高。

本发明采用的技术方案如下：

一种肝素钠的精制方法，其包括：

粗品溶解：将粗品肝素钠溶解于NaCl溶液得到粗溶液；

两次酶解：将所述粗溶液进行先后两次酶解得到酶解液；

乙醇沉淀：向所述酶解液中加入乙醇，经搅拌静置后过滤取沉淀；

离子交换柱纯化：将所述沉淀完全溶解后上离子交换柱纯化得到洗脱液；

吸附层析柱脱色：将所述洗脱液上吸附层析柱脱色得到肝素钠溶液。

肝素在体内与蛋白质复合成复合物，复合物的抗凝性随着其蛋白活性的去除而增强。本方法中，粗品肝素钠经过两次蛋白酶解，将肝素钠从蛋白质复合物中充分游离出来，避免蛋白质残留影响其活性。酶解液避免使用乙醇多次分级沉淀，能有效提高产品收率、降低物料浪费。肝素钠先经过离子交换柱初步纯化，除去杂蛋白以及杂多糖等杂质，再经过吸附层析柱脱色，避免氧化脱色，从而避免引入异物以及肝素钠失活，提高肝素钠的活性。同时，采用离子交换柱纯化以及吸附层析柱脱色两步纯化保证了产品的纯度。

发明较佳的实施例中，粗品溶解过程中，将NaCl溶液加热至30-45℃，所述NaCl溶液的浓度为2%（m/v），所述粗品肝素钠与所述NaCl溶液之比为1：5-10（kg：L），并在30-45℃下保持4-6h。

提高NaCl溶液的温度，可以提高肝素钠在其中的溶解度和溶解速率，从而提高物料的利用率。

本发明较佳的实施例中，两次酶解包括第一酶解和第二酶解；第一酶解包括：调节所述粗溶液至pH为7.5-8.5并加热至45-50℃，然后加入蛋白酶Ⅰ至其质量百分数为0.5%，溶液pH为7.5-8.5、温度45-50℃条件下保持维持4-6h得到第一酶解液。

本发明较佳的实施例中，调节所述第一酶解液至pH为8.5-9.5并加热至55-60℃，然后加入蛋白酶Ⅱ至其质量百分数为0.5%，溶液pH为8.5-9.5、温度55-60℃条件下保持4-6h，调节pH至6.5-7.0并加热至85-90℃，保温0.5h后得到酶解液。

由于采取了上述技术方案，蛋白质复合物中的蛋白质被酶解，其中的肝素钠充分地游离出来，并且再经过高温降解成高附加值的低分子肝素。

本发明较佳的实施例中，乙醇沉淀过程包括向所述酶解液中加入1.5倍酶解液体积的95%乙醇，搅拌均匀后静置沉淀4h-6h；过滤取沉淀。

由于采取了上述技术方案，肝素钠在乙醇中沉淀，经过过滤有效地将肝素钠分离，同时，不进行乙醇多次分级沉淀有效地降低了物料浪费。

本发明较佳的实施例中，离子交换柱纯化包括：将所述沉淀完全溶解后，调节pH至7.5-8.0，升温至45-50℃后上柱，上柱速度为1.0BV/h，上柱完成后平衡1h，然后先后进行洗脱杂质以及洗脱肝素钠。

本发明较佳的实施例中，用2BV温度为40-50℃的蒸馏水洗涤，流速为2BV/h；分别用2BV的1.0 mol/L的NaCl溶液洗涤两次，流速均为1.5BV/h，第一次调节NaCl溶液pH至5.0-5.5，第二次调节NaCl溶液pH 9.5-10.0；再用2BV的1.5 mol/L的NaCl溶液洗涤，流速为0.5BV/h；洗脱肝素钠包括：用2BV温度为40-50℃、浓度为2.5-3.5 mol/L的NaCl溶液洗脱，流速为0.5BV/h。