[发明专利]一种监控荧光定量PCR反应污染的方法

权利要求书

1.一种监控荧光定量PCR反应污染的方法，其包括下列步骤：

a.制备阳性对照质粒，该阳性对照质粒上包含待检目的基因和外参基因，该待检目的基因和外参基因不同源或同源性低至两者的相应引物不会错配；

b.制备PCR反应混合物，其包含：目的基因的引物和荧光探针；内参基因的引物和荧光探针；外参基因的引物和荧光探针；所述各个荧光探针具有不同的荧光基团；

c.在待检样品管的PCR反应混合物中加入待检样品DNA模板，在阳性对照管的PCR反应混合物中加入阳性对照质粒DNA模板，进行PCR扩增；

d.所有检测管中扩增的目的基因应全部为阳性，否则确定扩增失败；

e.待检样品管中扩增的内参基因应全部为阳性，否则确定扩增失败；

f.待检样品管中扩增的外参基因应全部为阴性，否则确定待检样品被阳性对照质粒气溶胶污染；

g.阳性对照管中扩增的内参基因应全部为阴性，否则确定被PCR产物气溶胶污染；

h.阳性对照管中扩增的外参基因应全部为阳性，否则确定扩增失败。

2.根据权利要求1所述的方法，其还包括步骤i.在阴性对照管中加入PCR反应混合物和无菌纯净水，阴性对照管中扩增的全部基因应全部为阴性，如果阴性对照管中出现外参基因阳性信号，确定为阳性对照质粒气溶胶污染；在外参基因是阴性条件下其它通道出现阳性信号，则确定为PCR产物气溶胶污染。

3.根据权利要求1所述的方法，该待检目的基因是人源的，该外参基因是植物或其它与人种属同源性较低来源的。

4.根据权利要求3所述的方法，该外参基因是玉米16S RNA基因。

5.根据权利要求1所述的方法，该待检目的基因是同一SNP位点的不同基因型。

6.根据权利要求5所述的应用，该待检目的基因是人线粒体乙醛脱氢酶ALDH2基因。

7.一种阳性对照质粒在监控荧光定量PCR反应污染中的应用，该阳性对照质粒包含待检目的基因和外参基因，该待检目的基因和外参基因不同源或同源性低至两者的相应引物不会错配。

8.根据权利要求7所述的应用，该待检目的基因是人源的，该外参基因是植物来源或其它与人种属同源性较低的。

9.根据权利要求8所述的应用，该外参基因是玉米16S RNA基因。

10.根据权利要求7所述的应用，该待检目的基因是同一SNP位点的不同基因型的。

11.根据权利要求10所述的应用，该待检目的基因是人线粒体乙醛脱氢酶ALDH2基因。