[发明专利]一种基于渗滤法的HIV-1/2型确认与初筛二合一试剂及其制备方法

说明书

本发明涉及一种生物检测试剂及其使用方法，特别涉及一种基于渗滤法的HIV‑1/2型确认与初筛二合一试剂及其制备方法。本发明所述的制备方法，包括以下步骤：在硝酸纤维素膜上包被HIV‑1型抗原和HIV‑2型抗原。

技术领域

本发明涉及一种生物检测试剂及其使用方法，特别涉及一种基于渗滤法的HIV-1/2型确认与初筛二合一试剂及其制备方法。

背景技术

现有的HIV确证方法主要为WB、RIBA和利用不同公司的产品进行两次酶免检测等，这些技术实现HIV的确证速度较慢，操作繁琐不能满足被检测者立即查看确证结果，且检测的样本只能使用血清或血浆；国内推荐的HIV确证方法WB、RIBA等只能用于HIV的确证，而不能用于对高危人群的筛查检测。

本发明在现有技术的基础上开发了一种快速检测试剂，可在30min以内完成对初筛为HIV阳性的样本进行确认，且适用于检测全血、血清及血浆样本。

本发明试剂通过对样本的重复检测或稀释，确认结果可区分患者感染为HIV-1型、HIV-2型感染还是HIV-1及HIV-2混合感染，现行的检测试剂只能实现对HIV-1的确证，并提示是否感染HIV-2。

本发明试剂比RIBA、WB等具有更高的检测灵敏性，缩短了HIV检测的“窗口期”，提高HIV检出效果。

发明内容

本发明提供一种基于渗滤法的HIV-1/2型确认与初筛二合一试剂的制备方法，所述制备方法，包括以下步骤：在硝酸纤维素膜上包被HIV-1型抗原和HIV-2型抗原。

其中，所述包被的HIV-1型抗原和HIV-2型抗原为不同浓度，其中能够识别HIV-1及HIV-2抗体检测点的抗原包被浓度高于分别特异性识别HIV-1抗体和HIV-2抗体检测点的抗原包被浓度。

优选的，本发明的方法如下：

在硝酸纤维膜上包被四个点，用于包被的抗原分别用探针包被液稀释至包被浓度，每个点按0.5ul进行点样，其中质控点①包被抗人IgG，其包被浓度为0.1mg/ml～5mg/ml；检测点③混合包被HIV-1型抗原gp41和HIV-2型抗原gp36，其包被浓度均为0.1mg/ml～5mg/ml；检测点②包被HIV-1型抗原gp41+gp120，其包被浓度为0.01mg/ml～1mg/ml，其浓度要低于检测点③中gp41的浓度，以保证其特异性识别HIV-1抗体，降低假阳性的产生；检测点④包被HIV-2型抗原gp36，其包被浓度为0.01mg/ml～1mg/ml，其浓度要低于检测点③中gp36的浓度。以保证其特异性识别HIV-1抗体，以降低假阳性的产生；

其中检测点③的抗原浓度为检测点②抗原浓度的2-8倍，检测点③的抗原浓度为检测点④抗原浓度的2-5倍。

包被完成后放置于37℃条件干燥。检测结果的显示，可以是三种形式，也可以是其它不同点和线的组合形式见附图1。

本发明进一步提供使用上述方法制备的一种基于渗滤法的HIV-1/2型确认与初筛二合一试剂及其使用方法。

当所述试剂用作确认试剂时，使用方法如下：首先加入待测样本(血清、血浆直接加样，全血经过本专利提供的渗滤装置过滤后加样)，待样本渗入硝酸纤维膜后滴加标记有抗人IgG、protein A或protein G的胶体金探针进行显色并进行结果判读；第一步判读：如果仅①②③同时显色，则可以确认为HIV阳性，且为HIV-1型阳性；如果仅①③④同时显色，则可以确认为HIV阳性并提示其为HIV-2型阳性；如果①②③④均显色，则可以确认为HIV阳性，且为HIV-1型阳性，并提示可能为HIV-1/2同时阳性。其他所有情况均为不确定。第二步判读：对于不确定的判读结果，如果是仅①②显色的情况，则同时做将样本量加倍和将样本稀释一倍后进行检测两个实验，其中任何一个实验出现仅①②③显色或仅①②④显色或①②③④均显色情况，则返回第一步进行结果判读。