[发明专利]DART‑MS法快速测定黑蒜中的氨基酸的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种DART-MS法快速测定黑蒜中的氨基酸的方法，属于离子色谱检测领域。

背景技术

黑蒜又名黑大蒜、发酵黑蒜，是用新鲜的生蒜，带皮放在高温高湿的发酵箱里自然发酵而成的食品，它在保留生大蒜原有成份、功能的基础上，使生大蒜的抗氧化、抗酸化功效提高了数十倍，又把生大蒜本身的蛋白质大量转化成为人体每天所必需的氨基酸，进而被人体迅速吸收，对增强人体免疫力、恢复人体疲劳，保持人体健康起到巨大积极作用，是速效性的保健食品。黑蒜中的主要营养成分氨基酸因产地和发酵工艺的不同差别较大。目前，氨基酸的主要检测方法为氨基酸测定仪法，操作步骤较为繁琐，费用较高。近年来，各式各样的黑蒜产品入市，所以建立一种快速检测黑蒜中氨基酸的方法，对维持黑蒜市场良好发展和保障人类健康具有重要意义。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是：提供一种DART-MS法快速测定黑蒜中的氨基酸的方法。

为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是：

DART-MS法快速测定黑蒜中的氨基酸的方法，其特征在于，包括下列步骤：

(1)样品前处理；(2)进样分析；(3)定性定量分析。

样品前处理的步骤如下：黑蒜去壳，用剪刀剪成碎块，置于研砵中研磨成泥状；准确称取5.00g于离心管中，加水至50ml，振荡30min，然后超声20min，最后离心5min(5000r/min)，待测。

进样分析的步骤如下：

①DART源(Ion Sense)；温度400℃；平移速度0.2mm/s；工作气体：氦气(5-5.5psi)；正离子模式；

②4000Q trap MS/MS(AB)；CUR 10psi；扫描范围100-300Da；扫描时间：0.5s；

③用移液枪(0-10μL量程)取待测样品5μL，均匀的点在玻棒的尖端处，保持所点位置的一致性，直接进样分析。

本发明的有益效果：

本发明中，样品前处理方法简单快捷；进样分析速度快，5min内可实现4个样品的测定；可实现黑蒜样品中氨基酸种类的快速筛查和半定量。

附图说明

下面结合附图对本发明的具体实施方式作进一步详细的说明。

图1是黑蒜样品总离子流色谱图。

图2是黑蒜样品A氨基酸检出质谱图。

图3是黑蒜样品B氨基酸检出质谱图。

图4是黑蒜样品C氨基酸检出质谱图。

图5是黑蒜样品D氨基酸检出质谱图。

具体实施方式

实施例1

本实施例提供的DART-MS法快速测定黑蒜中的氨基酸的方法，其特征在于，包括下列步骤：

(1)样品前处理；(2)进样分析；(3)定性定量分析。

样品前处理的步骤如下：黑蒜去壳，用剪刀剪成碎块，置于研砵中研磨成泥状；准确称取5.00g于离心管中，加水至50ml，振荡30min，然后超声20min，最后离心5min(5000r/min)，待测。

进样分析的步骤如下：

①DART源(Ion Sense)；温度400℃；平移速度0.2mm/s；工作气体：氦气(5-5.5psi)；正离子模式；

②4000Q trap MS/MS(AB)；CUR 10psi；扫描范围100-300Da；扫描时间：0.5s；

③用移液枪(0-10μL量程)取待测样品5μL，均匀的点在玻棒的尖端处，保持所点位置的一致性，直接进样分析。

实施例2实际样品检测

取不同黑蒜样品，标记为样品A、B、C、D，按实施例1的方法进行检测，经测定发现，不同种类氨基酸在质谱上响应模式不同，可归纳为两类：[M(母离子)+H]+模式和[M+Na]+模式，部分氨基酸(例：亮氨酸)两种模式均有响应。黑蒜样品中不同氨基酸响应模式见表1。

表1黑蒜中不同氨基酸DART-MS法响应模式分布

注*N(无响应)

图1是黑蒜样品总离子流色谱图(4针不同样品)。图2-5分别是黑蒜样品A、B、C、D的氨基酸检出质谱图。

经检测分析，发现黑蒜样品中主要含有亮氨酸、赖氨酸、谷氨酸、缬氨酸、丙氨酸、酪氨酸、色氨酸、胱氨酸、苯丙氨酸、脯胺酸等氨基酸，含量和种类因样品不同而不同。所含氨基酸的含量可以根据出峰的高度测定。

以上所述，仅是本发明的较佳实施例而已，并非是对本发明作其它形式的限制，任何熟悉本专业的技术人员可能利用上述揭示的技术内容加以变更或改型为等同变化的等效实施例。但是凡是未脱离本发明技术方案内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与改型，仍属于本发明技术方案的保护范围。