[发明专利]抗菌环（甘氨酸‑色氨酸‑亮氨酸‑D‑亮氨酸‑缬氨酸‑天冬酰胺）肽的制备方法

权利要求书

1.一种抗菌环(甘氨酸-色氨酸-亮氨酸-D-亮氨酸-缬氨酸-天冬酰胺)肽的制备方法，其特征在于，包括：

1)将如式(I)所示结构的基体树脂与Fmoc-Asn(trt)-OH在溶剂中进行接触反应以制得如式(II)所示结构的一级树脂，接着通过甲醇封头所述一级树脂，然后通过Fmoc洗脱剂洗脱去除所述一级树脂的Fmoc，最后经过哌啶脱保护以得到如式(III)所示结构的二级树脂；

2)将所述二级树脂依次与多种改性氨基酸进行多次改性反应得到如式(IV)所示结构的三级树脂；每步所述改性反应为：将树脂与所述改性氨基酸在溶剂和HATU的存在下进行接触反应，然后经过哌啶脱保护；单次的改性反应中的改性氨基酸依次独立为Fmoc-Val-OH、Fmoc-D-Leu-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Trp(Boc)-OH、Fmoc-Gly-OH；

3)将树脂洗脱剂洗脱去除所述三级树脂中的树脂基团以得到如式(V)所示结构的直链六肽；

4)在溶剂、PyAop、HOAt和DIPEA的存在下，所述直链六肽进行液相环合反应以制得如式(VI)所示结构的环状物；

5)通过基团洗脱剂洗脱去除所述环状物上的Boc和Trt以制得如式(VII)所示结构的抗菌环(甘氨酸-色氨酸-亮氨酸-D-亮氨酸-缬氨酸-天冬酰胺)肽；

其中，X为卤素，Fmoc为芴甲氧羰基，Boc为叔丁基氧羰基，Trt为三苯甲基。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其中，相对于2g的所述基体树脂，所述Fmoc-Asn(trt)-OH的用量为2-3mmol，所述Fmoc-Val-OH的用量为7.5-8.5mmol，所述Fmoc-D-Leu-OH的用量为7.5-8.5mmol，所述Fmoc-Leu-OH的用量为7.5-8.5mmol，所述Fmoc-Trp(Boc)-OH的用量为7.5-8.5mmol，所述Fmoc-Gly-OH的用量为7.5-8.5mmol。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其中，X为Br或Cl；

优选地，所述基体树脂为2-氯三苯甲基氯树脂。

4.根据权利要求1-3中任意一项所述的制备方法，其中，在步骤1)中，所述接触反应满足以下条件：反应温度为15-35℃，反应时间为1-2h；

优选地，所述Fmoc洗脱剂依次为N,N-二甲基甲酰胺、二氯甲烷。

5.根据权利要求4所述的制备方法，其中，在步骤2)中，单次的改性反应满足以下条件：反应温度为15-35℃，反应时间为1-2h。

6.根据权利要求4所述的制备方法，其中，在步骤2)中，单次的改性反应中，相对于1mmol的所述基体树脂，所述HATU的用量为1-2mmol。

7.根据权利要求5或6所述的制备方法，其中，在步骤3)中，所述树脂洗脱剂由三氟乙醇、乙酸与二氯甲烷组成；

优选地，所述三氟乙醇、乙酸与二氯甲烷的体积比为1：(0.8-1.2)：(7-10)；

更优选地，相对于2g的所述基体树脂，所述树脂洗脱剂的用量为25-35mL；

进一步优选地，在步骤3)中，所述洗脱满足以下条件：洗脱温度为15-35℃，洗脱时间为3-5h。

8.根据权利要求7所述的制备方法，其中，在步骤4)中，相对于100mg的所述直链六肽，所述PyAop的用量为0.4-0.5mmol，所述HOAt的用量为0.4-0.5mmol，所述DIPEA的用量为0.8-1.0mmol；

优选地，所述液相环合反应满足以下条件：反应温度为0-35℃，反应时间为12-36h；

更优选地，所述液相环合反应满足以下条件：0℃下滴加直链六肽到反应体系中，滴加完毕，在22-28℃的条件下反应10-15h。

9.根据权利要求8所述的制备方法，其中，在步骤5)中，所述基团洗脱剂由三氟乙酸和水组成；

优选地，所述三氟乙酸和水的体积比为(13-16)：1；

更优选地，相对于100mg的所述直链六肽，所述基团洗脱剂的用量为8-15mL；

进一步优选地，在步骤5)中，所述洗脱满足以下条件：洗脱温度为15-35℃，洗脱时间为1-2h。

10.根据权利要求1-3中任意一项所述的制备方法，其中，所述哌啶脱保护满足以下条件：哌啶溶液浓度为20-25重量％；相对于相对于2g的所述基体树脂，所述哌啶溶液的用量为20-30mL；反应时间为20-40min，反应温度为15-35℃。