[发明专利]抗菌环（甘氨酸‑色氨酸‑亮氨酸‑D‑亮氨酸‑缬氨酸‑天冬酰胺）肽的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及环肽的制备，具体地，涉及抗菌环(甘氨酸-色氨酸-亮氨酸-D-亮氨酸-缬氨酸-天冬酰胺)肽的制备方法。

背景技术

环肽Desotamide B(环(甘氨酸-色氨酸-亮氨酸-D-亮氨酸-缬氨酸-天冬酰胺)肽)从中国南海深海放线菌Streptomyces scopuliridis SCSIO ZJ46代谢产物中提取的，由Trp-Leu-D-Leu-Val-Asn-Gly组成的六环肽(J.Nat.Prod.2014,77(8),1937-1941)，其中的色氨酸是该环肽抗菌骨架必不可缺的氨基酸，并对其抗菌活性进行了测试，发现其对耐甲氧西林表皮葡萄球菌(MRSE)具有良好的抑制作用。目前对Desotamide B进行的深入研究表明，其中的天冬酰胺对抗菌活性起到了关键作用。相对Desotamide家族的另外几种环肽而言，Desotamide B抗菌范围更广。

但到目前为止，Desotamide B的获取仅限于从微生物代谢产物中提取，存在含量少、分离纯化复杂、成本昂贵等问题，制约了其进一步的生产应用，本发明可以高效的合成Desotamide B，降低获取成本。

发明内容

本发明的目的是提供一种抗菌环(甘氨酸-色氨酸-亮氨酸-D-亮氨酸-缬氨酸-天冬酰胺)肽的制备方法，通过该方法能够人工合成抗菌环(甘氨酸-色氨酸-亮氨酸-D-亮氨酸-缬氨酸-天冬酰胺)肽，并且该方法具有原料易得、分离纯化简便和产率高的优点。

为了实现上述目的，本发明提供了一种抗菌环(甘氨酸-色氨酸-亮氨酸-D-亮氨酸-缬氨酸-天冬酰胺)肽的制备方法，包括：

1)将如式(I)所示结构的基体树脂与Fmoc-Asn(trt)-OH在溶剂中进行接触反应以制得如式(II)所示结构的一级树脂，接着通过甲醇封头一级树脂，然后通过Fmoc洗脱剂洗脱去除一级树脂的Fmoc，最后经过哌啶脱保护以得到如式(III)所示结构的二级树脂；

2)将二级树脂依次与多种改性氨基酸进行多次改性反应得到如式(IV)所示结构的三级树脂；每步改性反应为：将树脂与改性氨基酸在溶剂和HATU的存在下进行接触反应，然后经过哌啶脱保护；单次的改性反应中的改性氨基酸依次独立为Fmoc-Val-OH、Fmoc-D-Leu-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Trp(Boc)-OH、Fmoc-Gly-OH；

3)将树脂洗脱剂洗脱去除三级树脂中的树脂基团以得到如式(V)所示结构的直链六肽；

4)在溶剂、PyAop、HOAt和DIPEA的存在下，直链六肽进行液相环合反应以制得如式(VI)所示结构的环状物；

5)通过基团洗脱剂洗脱去除环状物上的Boc和Trt以制得如式(VII)所示结构的抗菌环(甘氨酸-色氨酸-亮氨酸-D-亮氨酸-缬氨酸-天冬酰胺)肽；

其中，X为卤素，Fmoc为芴甲氧羰基，Boc为叔丁基氧羰基，Trt为三苯甲基。

在上述技术方案只能怪，本发明以基体树脂为载体，通过Fmoc-Asn(trt)-OH、Fmoc-Val-OH、Fmoc-D-Leu-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Trp(Boc)-OH与Fmoc-Gly-OH合成直链六肽甘氨酸-色氨酸(叔丁基氧羰基)-亮氨酸-D-亮氨酸-缬氨酸-天冬酰胺(三苯甲基)；然后使用PyAOP/HOAt/DIPEA体系对得到的直链肽进行液相环合，最后利用TFA/水脱去叔丁基氧羰基和三苯甲基保护即可得到目标环(甘氨酸-色氨酸-亮氨酸-D-亮氨酸-缬氨酸-天冬酰胺)肽。同时，该方法具有原料易得、分离纯化简便和产率高的优点。

本发明的其他特征和优点将在随后的具体实施方式部分予以详细说明。

附图说明

附图是用来提供对本发明的进一步理解，并且构成说明书的一部分，与下面的具体实施方式一起用于解释本发明，但并不构成对本发明的限制。在附图中：

图1是实施例1中制得的环(甘氨酸-色氨酸-亮氨酸-D-亮氨酸-缬氨酸-天冬酰胺)肽的核磁氢谱图；

图2是实施例1中制得的环(甘氨酸-色氨酸-亮氨酸-D-亮氨酸-缬氨酸-天冬酰胺)肽的核磁碳谱图；

图3是实施例1中制得的环(甘氨酸-色氨酸-亮氨酸-D-亮氨酸-缬氨酸-天冬酰胺)肽的质谱图。

具体实施方式

以下对本发明的具体实施方式进行详细说明。应当理解的是，此处所描述的具体实施方式仅用于说明和解释本发明，并不用于限制本发明。