[发明专利]一种天目不动杆菌MCDA01及其制备几丁质脱乙酰酶的方法

权利要求书

1.一种天目不动杆菌MCDA01，其特征在于，该菌株为天目不动杆菌(Acinetobacterschindleri)MCDA01，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC NO.13538。

2.一种天目不动杆菌MCDA01制备几丁质脱乙酰酶的方法，其特征在于：所述天目不动杆菌MCDA01选自保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC NO.13538的天目不动杆菌(Acinetobacter schindleri)MCDA01，具体步骤如下：

(1)配制2216E液体培养基、种子培养基、发酵培养基，其中

2216E液体培养基组成分为：蛋白胨0.5％，酵母粉0.1％，FePO₄ 0.01％，琼脂2％，陈海水配置；

种子培养基组成成分为：酵母粉0.1％，蛋白胨0.5％，NaCl1％，陈海水配置；

发酵培养基组成组分为：蛋白胨0.5％，葡萄糖0.2％，NH₄SO₄ 0.3％，KH₂PO₄ 0.15％，MgSO₄ 0.05％，粉末几丁质1％，陈海水配制；

(2)将菌株MCDA01接种至步骤(1)中的2216E液体培养基中斜面种子培养，并用筛选培养基筛选目标菌种，

(3)将上述步骤(2)中获取的斜面种子接种至种子培养基中进行摇瓶培养，培养完成后将其以1000r/min离心10min，取上清液即为种子液，

(4)将上述步骤(3)中获取的种子液以1％接种量接种至发酵培养基进行摇瓶培养，制备几丁质脱乙酰酶，

(5)每间隔2h取上述步骤(4)中样品进行测定几丁质脱乙酰酶活力，其中设置沸水浴灭活15min的酶液对照组。

3.根据权利要求2所述的一种天目不动杆菌MCDA01制备几丁质脱乙酰酶的方法，其特征在于：所述步骤(1)和(2)中2216E液体培养基pH值为7.0，斜面培养48h，获得的斜面种子能够使筛选培养基产生黄色圈。

4.根据权利要求2所述的一种天目不动杆菌MCDA01制备几丁质脱乙酰酶的方法，其特征在于：所述步骤(3)中种子液摇瓶培养条件为装液量20％，转速为180r/min，温度5℃-45℃，pH值为3.0-11.0，NaCl浓度为0％-10％，时间为0-24h。

5.根据权利要求2所述的一种天目不动杆菌MCDA01制备几丁质脱乙酰酶的方法，其特征在于：所述步骤(4)中发酵培养条件为装液量20％，发酵时间2h-96h，温度10℃-30℃，发酵起始pH值为4.0-10.0，选用1％-5％的几丁质为诱导剂。

6.根据权利要求2所述的一种天目不动杆菌MCDA01制备几丁质脱乙酰酶的方法，其特征在于：所述步骤(2)中筛选培养基组分为：胶体几丁质0.2％，K₂HPO₄0.07％，KH₂PO₄0.03％，MgSO₄0.05％，对硝基-N-乙酰苯胺0.02％，陈海水配置，所述筛选培养基pH值为7.0。

7.根据权利要求2所述的一种天目不动杆菌MCDA01制备几丁质脱乙酰酶的方法，其特征在于：所述步骤(5)中酶活力的鉴定，试管中加入30℃预保温的0.05mol/L、pH值为7.0磷酸缓冲液3mL，200mg/L的对硝基乙酰苯胺水溶液1mL，酶液1mL，于30℃水浴反应15min，沸水浴终止酶促反应，3000r/min离心10min，测定上清液的吸光度。