[发明专利]一种天目不动杆菌MCDA01及其制备几丁质脱乙酰酶的方法

说明书

本发明公开了一种来自海洋的天目不动杆菌MCDA01(Acinetobacter schindleri)，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC NO.13538，该菌株为革兰氏阴性短杆菌，无芽孢，菌落白色、不透明，表面光滑湿润，稍有突起，菌落边缘有小锯齿状，菌株在最适生长温度为30℃，最适生长pH为8.0，最适生长的NaCl浓度为4％，MCDA01菌株所产的几丁质脱乙酰酶的最适发酵pH为8.0，最适温度为30℃；本发明制备的几丁质脱乙酰酶在低温时具有较高活性，工业应用中可以节约能量和费用，利用该酶催化准备的壳聚糖具有脱乙酰度高、生物酶法绿色环保，实现了壳聚糖的绿色生产，具有很大的经济效益。

技术领域

本发明涉及一种微生物，是一种来自海洋的天目不动杆菌，特别是一种天目不动杆菌MCDA01及其制备几丁质脱乙酰酶的方法。

背景技术

几丁质又叫甲壳素、甲壳质，是天然有机化合物中仅次于纤维素含量的物质，广泛存在于无脊椎动物的外骨骼及表皮和真菌及藻类的细胞壁中。几丁质是由N-乙酰葡萄糖胺通过β-1,4糖苷键连接而成的直链大分子物质，不溶解于水和有机溶剂，不容易被广泛的开发利用。如几丁质脱乙酰度超过55％便可得到壳聚糖，随之其溶解性增加，并具有抗癌、降低胆固醇、降血压等生物活性，可广泛应用于医药、食品、化工、化妆品等行业，有很高的应用价值和开发前景。

目前，几丁质转化为壳聚糖的处理方法有化学热碱法和生物酶法两种，其中，化学热碱法存在反应时间长、用碱量大、成本高的缺陷，存在污染环境的危害，并且由于化学热碱发处理其脱乙酰度不易控制而导致产品质量不稳定，不适于大规模生产。此外，生物酶法主要采用几丁质脱乙酰酶来酶解几丁质获取壳聚糖，但目前微生物制备几丁质脱乙酰酶存在产酶活力低、脱乙酰效果差等问题，急需扩大对产几丁质脱乙酰酶生微生物资源的筛选，满足壳聚糖生物酶法工业化生产需要。

发明内容

为了针对上述的化学热碱法存在的如不环保、产品稳定性差、不易控制和生物酶解法存在的酶活性低、脱乙酰效果差、成本高等缺陷，本发明提供了一种绿色环保，提高脱乙酰度的几丁质脱乙酰酶的方法，具体方案如下：

一种天目不动杆菌MCDA01，该菌株为天目不动杆菌(Acinetobacter schindleri)MCDA01，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNO.13538。

进一步的，所述MCDA01为革兰氏阴性短杆菌，无芽孢，菌落白色、不透明，表面光滑湿润，稍有突起，菌落边缘有小锯齿状。

一种天目不动杆菌MCDA01制备几丁质脱乙酰酶的方法，其特征在于，所述天目不动杆菌MCDA01制备几丁质脱乙酰酶的方法具体包括如下步骤：

(1)配制2216E液体培养基、种子培养基、发酵培养基，

(2)将菌株MCDA01接种至2216E液体培养基中斜面种子培养，并用筛选培养基筛选目标菌种，

(3)将上述步骤(2)中获取的斜面种子接种至种子培养基中进行摇瓶培养，培养完成后将其以1000r/min离心10min，取上清液即为种子液，

(4)将上述步骤(3)中获取的种子液以1％接种量接种至发酵培养基进行摇瓶培养，制备几丁质脱乙酰酶，

(5)每间隔2h取上述步骤(4)中样品进行测定几丁质脱乙酰酶活力，其中设置沸水浴灭活15min的酶液对照组。