[发明专利]登革2型病毒NS5蛋白C端截短片段及其制备方法与应用

权利要求书

1.登革2型病毒NS5蛋白C端截短片段，其特征在于，其氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示，或该序列经替换、缺失或添加一个或几个氨基酸形成的具有同等功能的氨基酸序列。

2.含有His标签的权利要求1所述截短片段重组多肽NS5/C70的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)重组质粒pQE30-NS5/C70的构建：以含有登革2型病毒NS5蛋白编码基因的质粒为模板，设计引物，进行PCR扩增，得到的扩增产物用BamH I、Hind III双酶切，纯化后回收小片段与线性载体pQE30连接，获得重组质粒pQE30-NS5/C70；

(2)原核表达系统的构建：将重组质粒pQE30-NS5/C70转化到E.Coli感受态M15[pREP4]中，获得重组菌M15/pQE30-NS5/C70；

(3)重组多肽NS5/C70的表达及纯化；

其中，步骤(1)的引物为：

正向引物F1 5’-GGGGATCCCCAAACCTAGACATAATCGGGAAA-3’

反向引物R1 5’-GCAAGCTTCTACCACAGGACTCCTGCCT-3’。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤(3)具体为：

①增菌培养阶段：将重组菌M15/pQE30-NS5/C70接种于含Amp和Kana的2×YT培养基中，添加1％的葡萄糖，于180rpm，37℃通气条件下培养至OD₅₇₀为0.7-0.8；

②诱导阶段：加入IPTG至终浓度为1mM，于25℃，180rpm诱导4h；

③离心收集上清并用0.45μm滤膜过滤；收集滤液用镍柱亲和层析纯化，再经不同浓度的咪唑溶液梯度洗脱，最终得到纯化的NS5/C70重组多肽。

4.权利要求1所述登革2型病毒NS5蛋白C端截短片段在制备用于不同血清型登革病毒感染的免疫学诊断试剂中的应用。

5.由权利要求1所述登革2型病毒NS5蛋白C端截短片段制备的用于不同血清型登革病毒感染的免疫学诊断试剂。

6.权利要求1所述登革2型病毒NS5蛋白C端截短片段在制备用于不同血清型登革病毒感染的胶体金免疫层析诊断试纸条中的应用。

7.用于登革病毒感染的胶体金免疫层析诊断试纸条，其特征在于，所述试纸条由样品垫、胶体金垫、NC膜、吸水滤纸和PVC底板组成，样品垫、胶体金垫、NC膜和吸水滤纸依次相互叠加粘贴在PVC底板上；

其中，胶体金垫上包被有羊抗人二抗-胶体金复合物；NC膜上设有测试线和质控线，所述测试线固定有权利要求1所述登革2型病毒NS5蛋白C端截短片段或含有His标签的重组多肽，所述质控线固定有SPA。

8.含有权利要求5所述诊断试剂或权利要求7所述诊断试纸条的用于各型登革病毒感染的快速检测试剂盒。