[发明专利]流式细胞术检测鸡胸腺T淋巴细胞亚群的方法

权利要求书

1.流式细胞术检测鸡胸腺T淋巴细胞亚群的方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤1，获取受试鸡胸腺组织并制取单细胞悬液，所述制取单细胞悬液具体为：将获取的胸腺组织用机械破碎法获得单细胞，过滤、洗涤，所述洗涤具体是以600-1000r/min的转速离心5分钟，后用预冷的PBS液稀释细胞，获得浓度为1×10⁶-1×10⁷个/mL单细胞悬液，于4℃保存备用；

步骤2，取所述单细胞悬液两份，一份加入抗鸡的CD3、CD4和CD8单克隆抗体各一头份，旋涡混匀，于4℃避光染色，所述染色的时间为30min，用于检测；另一份用于设置阴性区；

步骤3，取染色后的细胞液，用PBS洗涤并重悬细胞，使用流式细胞仪进行检测，所述使用流式细胞仪进行检测，包括：在前向散射光/侧向散射光双参数图中调节电压和电流线性增益参数，使组织细胞团位于散点图的中央区；选取胸腺细胞并设门；用阴性设置管设定阴性区；用检测管调节通道的荧光补偿，完成样品的数据获取；

所述调节电压和电流线性增益参数，具体为：调节侧向散射光通道的电压，使细胞位于侧向散射光轴的中段；调节前向散射光通道的电流线性增益参数，使组织细胞与细胞碎片分开；

所述调节通道的荧光补偿，具体为：在CD4和CD8的双参数图中，调节CD4⁺CD8⁺细胞的比例大于60%，且与CD8单阳性细胞间具有分界；

步骤4，分析检测结果，获得鸡胸腺T淋巴细胞亚群比例；分析检测结果，包括：圈取目标细胞并设门、分别在CD3/CD4、CD3/CD8、CD4/CD8象限图中准确界定双阴性区、单阴性区和双阳性区，分别读取CD3⁺、CD3⁺CD4⁺、CD3⁺CD8⁺ 、CD4⁺CD8^-、CD4^-CD8⁺和CD4⁺CD8⁺T淋巴细胞百分比，从而获得鸡胸腺T淋巴细胞亚群比例；所述圈取目标细胞并设门要求圈取除碎片以外98%以上的胸腺组织细胞。

2.如权利要求1所述的流式细胞术检测鸡胸腺T淋巴细胞亚群的方法，其特征在于，所述设定阴性区具体为：用阴性设置管上流式细胞仪，设定散点图中十字门左下方的区域为阴性区，调节电压使阴性区内细胞百分比大于98%。