[发明专利]一种千年健指纹图谱的构建方法及其标准指纹图谱

权利要求书

1.一种千年健指纹图谱的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1、 供试品溶液的制备：精密称取千年健粉末，加入甲醇后超声提取，静置冷却，用甲醇补足失重，离心，取上清液蒸发干燥，残渣加甲醇复溶，涡旋，过滤，取续滤液，所得溶液即为供试品溶液；

S2、 供试品溶液的测定：吸取供试品溶液注入液相色谱仪，以高效液相色谱法采用梯度洗脱进行测定，得到千年健的指纹图谱；

其中，高效液相色谱的色谱条件为：色谱柱的填料为十八烷基硅烷键合硅胶；流动相 A为乙腈，流动相 B 为磷酸水溶液，流动相中 A 与 B 的体积比随时间逐渐增加；检测波长为 285～305nm；

梯度洗脱的程序是：

0～10 分钟时，流动相 A∶流动相 B＝2.5:97.5；

10～20 分钟时，流动相 A∶流动相 B＝2.5：97.5～3：97；

20～35 分钟时，流动相 A∶流动相 B＝3：97～5：95；

35～40 分钟时，流动相 A∶流动相 B＝5：95～8：92；

40～50 分钟时，流动相 A∶流动相 B＝8：92～10∶90；

50～60 分钟时，流动相 A∶流动相 B=10∶90～14：86；

60～80 分钟时，流动相 A∶流动相 B=14：86～15：85；

80～90 分钟时，流动相 A∶流动相 B=15：85～20：80；

90～110 分钟时，流动相 A∶流动相 B=20：80～30：70；

梯度洗脱过程中，流速为 0.5～1.0 毫升/分钟，梯度洗脱程序中的比例均为体积比。

2.根据权利要求1所述的千年健指纹图谱的构建方法，其特征在于，所述步骤 S1 中千年健粉末全部能够通过标准药典筛三号筛。

3.根据权利要求1所述的千年健指纹图谱的构建方法，其特征在于，所述步骤 S1 中过滤为用 0.45μm 有机系微孔滤膜过滤。

4.根据权利要求1所述的千年健指纹图谱的构建方法，其特征在于，所述高效液相色谱的色谱柱采用 Phenomenex C18 色谱柱，规格为 250mm×4.6 mm×5μm。

5.根据权利要求1所述的千年健指纹图谱的构建方法，其特征在于，所述高效液相色谱的检测波长为 290nm。

6.根据权利要求1所述的千年健指纹图谱的构建方法，其特征在于，高效液相色谱分析的柱温为 25℃～45℃。

7.根据权利要求 6 所述的千年健指纹图谱的构建方法，其特征在于，柱温为 30℃。

8.根据权利要求1所述的千年健指纹图谱的构建方法，其特征在于，0～10 分钟流速为0.5毫升/分钟，10～110 分钟流速为1毫升/分钟。

9.根据权利要求1所述的千年健指纹图谱的构建方法，其特征在于，所述流动相 B 是体积分数为 0.01%的磷酸水溶液。