[发明专利]检测HIV-1 2-LTR DNA的PCR引物组、探针及其试剂盒和检测方法

权利要求书

1.一种检测人类免疫缺陷病毒1型2-LTR DNA的检测引物组和检测探针，其特征在于：所述的检测引物组由以下6条引物序列或以下6条引物序列的互补序列组成：

所述的检测引物组由以下6条引物序列：引物1：其序列为SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列；引物2：其序列为SEQ ID NO：2所示的核苷酸序列；引物3：其序列为SEQ ID NO：3所示的核苷 酸序列；引物4：其序列为SEQ ID NO：4所示的核苷酸序列；引物5：其序列为SEQ IDNO：5所 示的核苷酸序列；引物6：其序列为SEQ ID NO：6所示的核苷酸序列；

所述的检测探针包括探针1和探针2；

所述的探针1的序列为SEQ ID NO：7所示的核苷酸序列，探针1的核苷酸序列的5’端标记有FAM荧光基团，探针1的核苷酸序列的3’端标记有TAMRA淬灭基团；所述的探针2的序列为SEQ ID NO：8所示的核苷酸序列，探针2的核苷酸序列的5’端标记有FAM荧光基团，探针2的核苷酸序列的3’端标记有淬灭基团TAMRA。

2.如权利要求1所述的检测引物组和检测探针，其特征在于：所述的检测引物组和检测探针用于实时荧光定量PCR技术，实现对HIV-1 2-LTRDNA的检测。

3.一种用于检测人类免疫缺陷病毒1型2-LTR DNA的试剂盒，其特征在于：所述的试剂盒包括权利要求1所述的检测引物组和检测探针。

4.如权利要求3所述的试剂盒，其特征在于：所述的试剂盒还包括：细胞定量引物组和细胞定量探针；

所述的细胞定量引物组由以下4条引物序列或以下4条引物序列的互补序列组成：引物7：其序列为SEQ ID NO：9所示的核苷酸序列；引物8：其序列为SEQ ID NO：10所示的核苷酸序列；引物9：其序列为SEQ ID NO：11所示的核苷酸序列；引物10：其序列为SEQ ID NO：12所示的核苷酸序列；所述的细胞定量探针的序列为SEQ ID NO：13所示的核苷酸序列；细胞定量探针的核苷酸序列的5’端标记有荧光基团，所述的荧光基团选自FAM、HEX、VIC、CY5和TET中的一种，细胞定量探针的荧光基团应当不同于检测探针的荧光基团；细胞定量探针的核苷酸序列的3’端标记有淬灭基团，所述的淬灭基团选自TAMRA、MGB和BHQ中的一种；所述的细胞定量探针的荧光基团应当不同于检测探针的荧光基团。

5.如权利要求3-4任意一项所述的试剂盒，其特征在于：所述的试剂盒还包括酶系和PCR反应试剂；

所述的酶系为等体积混合的Taq DNA聚合酶与尿嘧啶-N-糖基化酶；

所述的PCR反应试剂包括：①pH 8.5的Tris-硫酸，储存浓度为1M；②柠檬酸钠，储存浓度为100mM；③(NH₄)₂SO₄，储存浓度为1M；④MgSO₄，储存浓度为1M；⑤十二烷基聚乙二醇醚Brij-35，储存浓度为3％；⑥乙酰化牛血清白蛋白，储存浓度为30mg/mL；⑦dNTP，储存浓度为10mM。

6.如权利要求5所述的试剂盒，其特征在于：所述的试剂盒还包括：强阳性质控品、弱阳性质控品、阴性对照品和阳性定量参考品。

7.如权利要求6所述的试剂盒，其特征在于：

所述的强阳性质控品为含有HIV-1 2-LTR DNA序列的质粒，且其中HIV-1 2-LTR DNA基因的浓度为0.05～0.5拷贝/每个细胞；所述的弱阳性质控品为含有HIV-1 2-LTR DNA序列的质粒，且其中HIV-1 2-LTR DNA基因的浓度为0.0005～0.005拷贝/每个细胞；所述的阴性对照品为生理盐水；所述的阳性定量参照品为已知浓度的携带HIV-1 2-LTR DNA序列的质粒或携带该质粒的细胞。