[发明专利]一种呋喃西林生物标识物5-硝基-2-糠醛的气相色谱质谱检测方法

说明书

本发明公开了一种呋喃西林生物标识物5‑硝基‑2‑糠醛的气相色谱质谱检测方法，以5‑硝基‑2‑糠醛(NF)为检测对象，采用高氯酸为氧化性试剂将目标物首先氧化成有机酸，随后在浓硫酸的催化作用下与甲醇进行酯化反应，最终转化为热稳定性稳定好、质谱检测器下响应灵敏的化合物，突破现有研究无法克服内源性等非呋喃西林源生物标示物产生的局限性。

技术领域

本发明涉及一种呋喃西林生物标识物5-硝基-2-糠醛的检测方法，特别涉及一种呋喃西林生物标识物5-硝基-2-糠醛的气相色谱质谱检测方法。

背景技术

硝基呋喃类药物的化学性质不稳定，尤其对光照等十分敏感，而且在生物体内代谢速率非常快，浓度半衰期从几小时到十几小时不等，动物喂药24小时之后体内基本检测不到硝基呋喃原形药的存在。因此，从饲料或用药动物体内检测硝基呋喃原形药是比较困难且不准确的，原药的残留量不足以反映真实的用药情况。然而，硝基呋喃的代谢产物与组织蛋白结合后在生物体内却可以长期存在，研究表明在停药56天后检测，动物体内仍然可以检测到稳定含量的代谢产残留物。一直以来，对硝基呋喃类抗生素的违禁检测，是通过对其生物标示残留物的测定。以检测呋喃西林的代谢物氨基脲(SEM)为例，在适当的酸性水解氛围下，与组织蛋白结合的SEM会重新游离出来。从检测的角度出发，SEM是一类小分子量化合物，对液相色谱常用的紫外和荧光检测器响应均不理想，因而加入2-硝基苯甲醛(2-NBA)作为衍生化试剂，衍生产物NBA-SEM经过分离纯化后，用UPLC/MS/MS分析，检测限可达欧盟法规要求的1μg/Kg。

目前针对呋喃西林违禁用药的检测方法主要有高效液相色谱与质谱、紫外、荧光检测器联用法、分光光度法，薄层色谱法以及免疫分析法等，基于氨基脲(SEM)为生物标示物的检测方法无法分辨“阳性”的SEM究竟来自于呋喃西林还是自然产生。这也使得沿用至今的SEM是否能够继续作为呋喃西林检测的标示物在业内引起了巨大争议。

发明内容

本发明的目的在于提供一种呋喃西林生物标识物5-硝基-2-糠醛的气相色谱质谱检测方法，以5-硝基-2-糠醛(NF)为检测对象，采用高氯酸为氧化性试剂将目标物首先氧化成有机酸，随后在浓硫酸的催化作用下与甲醇进行酯化反应，最终转化为热稳定性稳定好、质谱检测器下响应灵敏的化合物，突破现有研究无法克服内源性等非呋喃西林源生物标示物产生的局限性。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：

一种呋喃西林生物标识物5-硝基-2-糠醛的气相色谱质谱检测方法，包括如下步骤：

(1)待检测液制备

称取1.0±0.1g的样品，放入50毫升的样品管内，加入2毫升高氯酸，充分涡旋后，避光放置于40℃的水浴中氧化反应20分钟，加入100μL甲醇，5毫升浓硫酸，充分涡旋后，避光放置于60℃的水浴中酯化反应20分钟后，冷却至室温，加入2毫升正己烷，充分涡旋后，6000转/min离心五分钟，取1.0毫升上清液用0.2μm的滤膜过滤，得待检测液供气相色谱串联质谱仪分析；

(2)GC-MS分析

待检测液经气相色谱串联质谱仪检测分析，外标法定量。

作为优选，所述高氯酸酸的浓度为12moL/L。

作为优选，所述硫酸浓度为18.4mol/L。

作为优选，气相色谱检测条件为：色谱柱：DB-5MS弹性石英毛细管柱柱，规格：30m*0.25mm*0.25μm；载气为纯度大于99.99％的高纯氦气，流量1.0ml/min；柱温为80℃保持1min，以20℃/min升至250℃，保持10min；进样口温度为220℃；不分流进样模式，进样量1.0μL