[发明专利]一种检测包含潜伏期结核感染的试剂盒及其引物对和探针

权利要求书

1.一种检测包含潜伏期结核感染的试剂盒，其特征在于，其包括至少一种反应液，所述反应液包括一引物对和一探针，所述的引物对和探针针对结核分枝杆菌特异性T细胞分泌的下游趋化因子CXCL9、CXCL11或CXCL13的基因序列设计；其中，

针对趋化因子CXCL9设计的所述引物对的正向引物是如SEQ ID NO.1所示序列的核酸，反向引物是如SEQ ID NO.2所示序列的核酸，所述探针的核苷酸序列如SEQ ID NO.9所示；

针对趋化因子CXCL11设计的所述引物对的正向引物是如SEQ ID NO.3所示序列的核酸，反向引物是如SEQ ID NO.4所示序列的核酸，所述探针的核苷酸序列如SEQ ID NO.10所示；或者

针对趋化因子CXCL13设计的所述引物对的正向引物是如SEQ ID NO.5所示序列的核酸，反向引物是如SEQ ID NO.6所示序列的核酸，所述探针的核苷酸序列如SEQ ID NO.11所示。

2.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述反应液均还包括一管家基因的引物对和一探针；所述引物对中，正向引物是如SEQ ID NO.7所示序列的核酸，反向引物是如SEQ ID NO.8所示序列的核酸，所述探针的核苷酸序列如SEQ ID NO.12所示。

3.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述反应液均还包括PCR反应缓冲液和2’-脱氧核苷三磷酸；较佳地，所述2’-脱氧核苷三磷酸的浓度为100mM。

4.如权利要求1～3任一项所述的试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒为实时荧光定量PCR试剂盒；和/或所述试剂盒还包括EZ Taq混合液和阴性质控品；所述EZ Taq混合液包括热启动Taq酶，浓度优选1-5U/μl；更佳地，所述试剂盒还包括结核抗原管和本底对照管，所述结核抗原管中包含抗原刺激物或其组合物；所述抗原刺激物或其组合物优选抗原CFP10衍生肽、抗原ESAT6衍生肽、抗原PPE衍生肽和抗原Ag85A衍生肽中的至少一种；所述抗原CFP10衍生肽的氨基酸序列优选如SEQ ID NO.13所示，所述抗原ESAT6衍生肽的氨基酸序列优选如SEQ ID NO.14所示，所述抗原PPE衍生肽的氨基酸序列优选如SEQ ID NO.15所示，所述抗原Ag85A衍生肽的氨基酸序列优选如SEQ ID NO.16所示。

5.一种检测包含潜伏期结核感染的探针，其特征在于，所述探针的核苷酸序列如SEQ ID NO.9、SEQ ID NO.10、SEQ ID NO.11或者SEQ ID NO.12所示。

6.一种检测包含潜伏期结核感染的引物对，其特征在于，所述引物对的一条是如SEQ ID NO.1所示序列的核酸，另一条是如SEQ ID NO.2所示序列的核酸；所述引物对的一条是如SEQ ID NO.3所示序列的核酸，另一条是如SEQ ID NO.4所示序列的核酸；所述引物对的一条是如SEQ ID NO.5所示序列的核酸，另一条是如SEQ ID NO.6所示序列的核酸；或者所述引物对的一条是如SEQ ID NO.7所示序列的核酸，另一条是如SEQ ID NO.8所示序列的核酸。

7.一种反应液，其特征在于，其包括一引物对和一探针，所述的引物对和探针针对结核分枝杆菌特异性T细胞分泌的下游趋化因子CXCL9、CXCL11或CXCL13的基因序列设计；其中，

针对趋化因子CXCL9设计的所述引物对的正向引物是如SEQ ID NO.1所示序列的核酸，反向引物是如SEQ ID NO.2所示序列的核酸，所述探针的核苷酸序列如SEQ ID NO.9所示；

针对趋化因子CXCL11设计的所述引物对的正向引物是如SEQ ID NO.3所示序列的核酸，反向引物是如SEQ ID NO.4所示序列的核酸，所述探针的核苷酸序列如SEQ ID NO.10所示；或者

针对趋化因子CXCL13设计的所述引物对的正向引物是如SEQ ID NO.5所示序列的核酸，反向引物是如SEQ ID NO.6所示序列的核酸，所述探针的核苷酸序列如SEQ ID NO.11所示。