[发明专利]用于SOST蛋白或抗体筛选的细胞株及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种用于SOST蛋白或抗体评估和/或筛选的细胞株，其特征在于，其是稳定表达wnt1蛋白基因、LRP6受体基因以及荧光素酶基因的HEK293细胞。

2.如权利要求1所述的细胞株，其特征在于，其共转染有所述wnt1蛋白基因的质粒1、包含所述LRP受体基因的质粒2以及包含所述荧光素酶基因的质粒3；较佳地，所述wnt1蛋白是rmwnt1蛋白，所述LRP6受体是hLRP6，所述荧光素酶是连接有TCF-LEF元件的luc2P；更佳地，所述质粒1选用rmwnt1-pCMV6-Kan/Neo；所述质粒2其质粒骨架为pCDNA3.1/Hygro(-)；所述的质粒3选用pGL4.49[luc2P/TCF-LEF/Hygro]。

3.如权利要求1或2所述的细胞株，其特征在于，所述细胞株其表达的相对荧光强度(RLU)至少为100,000，优选不超过500,000；所述SOST蛋白对细胞株表达wnt1蛋白的抑制活性IC₅₀不高于110nM，优选至少为25nM；更优选地，所述的相对荧光强度RLU为248,000，所述的抑制活性IC₅₀为43nM。

4.如权利要求1-3任一项所述的细胞株的制备方法，其包含以下步骤：

(1)制备含有所述LRP受体基因的质粒；

(2)将步骤(1)中的质粒和含有所述wnt1蛋白基因的质粒、以及含有所述荧光素酶基因的质粒用脂质体共转染HEK293细胞。

5.如权利要求4所述的细胞株的制备方法，其特征在于，所述脂质体为Lipofectamine2000；优选地，将共转染HEK293细胞种板后，还加入抗生素加压筛选；优选地，抗生素为潮霉素和遗传霉素；更优选地，潮霉素的终浓度为300μg/ml，和遗传霉素的终浓度为400μg/ml。

6.如权利要求5所述的细胞株的制备方法，其特征在于，三种所述的质粒用量比为1:1:1、所述的种板的时间为2天和/或加压筛选的时间为2～3周；优选地，加压筛选的时间为3周。

7.一种SOST蛋白或抗体活性的评估或筛选方法，其包括以下步骤：

(1)梯度稀释待测SOST蛋白；或者梯度稀释待测抗体，加入一定浓度的SOST抗体孵育；

(2)再和如权利要求1-3任一项所述的细胞株共培养；

(3)然后加入荧光素酶检测试剂，避光、室温反应后读数；

(4)根据读数判断SOST抗体或蛋白活性值。

8.如权利要求7所述的SOST蛋白或抗体活性的评估或筛选方法，其特征在于，所述待测抗体的浓度为850nM～1nM；所述待测SOST蛋白浓度为4.5μM～80pM；所述孵育的温度为37℃，时间为1小时；所述的共培养细胞株数量为每反应2×10⁴个；共培养的温度为37℃，时间为18～20小时；和/或，所述的避光室温反应时间为15分钟。

9.如权利要求1～3任一项所述的细胞株在SOST蛋白或抗体活性评估或筛选中的应用。

10.一种包含权利要求1～3任一项所述的细胞株的制剂，较佳地，所述制剂为SOST蛋白或抗体检测制剂。