[发明专利]用于SOST蛋白或抗体筛选的细胞株及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种用于SOST蛋白或抗体筛选的细胞株及其制备方法和应用。细胞株是稳定表达wnt1蛋白基因、LRP受体基因以及荧光素酶基因的HEK293细胞，该细胞株可用于SOST蛋白或抗体活性的评估或筛选。本发明公开的细胞株可以稳定传代，其荧光强度较高，而且SOST蛋白对wnt1蛋白的抑制活性IC₅₀较低，且检测窗口较大，可以更好的体现不同SOST抗体的生物学活性，提高稳定性，减少变异系数。在SOST蛋白或抗体活性的评估和/或筛选中具有快速、灵敏及稳定的优点。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种用于SOST蛋白或抗体筛选的细胞株、该细胞株的制备方法、包含该细胞株的制剂以及细胞株或制剂在SOST蛋白或抗体筛选中的应用。

背景技术

硬骨素蛋白(Sclerostin，SOST)由SOST基因编码，其为213个氨基酸的分泌糖蛋白。硬骨素是含胱氨酸纽结(cystine-knot)因子超家族的成员，与DAN/Cerberus蛋白质家族相关，通过抑制骨形态发生蛋白(bone morphogenetic protein，BMP)与受体的结合直接干扰BMP信号，并因此干扰BMP信号级联。由于硬骨素是骨形成的骨细胞特异性负调节物，这使得其成为用于骨质疏松症治疗的有吸引力的药物靶。Amgen在开发用于骨质疏松症治疗的针对硬骨素蛋白的抗体，已向FDA提交上市申请，Novartis和Eli Lily也在开发硬骨素阻断抗体，目前处于临床2期。

硬骨素通过结合至低密度脂蛋白受体相关蛋白5和6(LRP5/LRP6)以及Frizzled受体作为典型的Wnt信号的负调控因子起作用。经典Wnt通路描述Wnt蛋白与细胞表面LRP/Frizzled受体家族结合后的一系列反应，包括胞内蛋白Dishevelled(Dsh)的激活及最终细胞核内β-catenin水平的变化。Dishevelled是细胞膜相关Wnt受体复合物的关键成分，它与Wnt结合后被激活，并抑制下游蛋白质复合物，包括axin、GSK-3与APC蛋白。axin/GSK-3/APC复合体可促进细胞内信号分子β-catenin的降解。当“β-catenin降解复合物”被抑制后，胞浆内的β-catenin得以稳定存在，部分β-catenin进入细胞核与TCF-LEF转录因子家族作用并促进特定基因的表达。β-catenin作为一种多功能的蛋白质，广泛存在于各种类型的细胞，如内皮细胞、成纤维细胞、成骨细胞中，在参与这些细胞的增殖、分化和凋亡等方面发挥了重要的调节作用。Wnt/β-catenin途径的激活是间叶细胞分化为骨骼和脂肪细胞，以及成骨细胞和软骨细胞的分化所必需的。在调控骨量中β-catenin发挥了重要作用，通过增加骨保护素(OPG)的表达，从而提高了OPG与核因子-κB配体受体激活剂(RANKL)的比例，其净效果是减少破骨细胞的生成。硬化蛋白SOST是LRP5/LRP6复合物的配体，阻止了受体与Wnt的结合，从而阻断了Wnt/β-catenin信号通路。GSK-3β顺利与多蛋白复合物结合，促使β-catenin的磷酸化，导致其最终降解。