[发明专利]一种E75肽的液相合成方法

说明书

技术领域

本发明涉及多肽合成领域，具体是一种E75肽的液相合成方法。

背景技术

乳腺癌是女性中最常见的癌症，并且是女性中与癌症相关死亡的第二主导因素。过去20年间在乳腺癌治疗中的主要进展使得无疾病生存(DFS)率显著提高。例如，已经将利用对肿瘤相关抗原有反应性的抗体疗法用于阻断特定的细胞过程以减缓疾病进展或者预防疾病复发。尽管近来在乳腺癌治疗上有所进展，但是由于目前治疗乳腺癌的方法无法有效地根除残留的癌细胞，因而乳腺癌的复发率和转移率比较高，而一旦出现转移和复发，对于患者来说面临一个更为复杂和难治的问题。

免疫治疗从理论上来说完全可以解决这一问题，疫苗品种或源于自身肿瘤细胞，或源于外部的一些活性物质如多肽等。由于这类品种不同于化学药物，通常源于人体自身组织，因此副作用小，易于控制，使得利用肿瘤抗原多肽疫苗进行肿瘤免疫治疗成为一个新的模式和热点。

HER2/neu基因在以乳腺癌为代表的各种腺癌中过表达，在癌细胞内产生过量的HER2/neu蛋白。HER2/neu蛋白在癌细胞内被片段化，产生由8-12个氨基酸构成的HER2/neu肽。HER2/neu肽与MHC I类分子结合并转移到癌细胞表面作为抗原提呈，成为癌细胞的标志物。E75肽是一种HER2/neu肽，由9个氨基酸组成，其氨基酸序列为Lys-Ile-Phe-Gly-Ser-Leu-Ala-Phe-Leu。E75肽/MHC I类分子复合体激活树突状细胞，并转移到淋巴结，激活用于识别所述E75肽/MHC I类分子复合体的CD8阳性T淋巴细胞，使其分化成为细胞毒性T细胞(CTL)，并且增殖。CTL识别具有E75肽/MHC I类分子复合体的肿瘤细胞，并攻击该肿瘤细胞。因此，E75肽可以作为癌症疫苗使用。国内外多项研究表明，E75肽与体内的HLA细胞结合后，能激发体内杀死肿瘤的T细胞的产生。T细胞能识别具备这种多肽以及Her2/neu蛋白的肿瘤细胞，从而阻止具有Her2/neu蛋白的肿瘤细胞的扩散和转移。已经有大量的关于E75肽的实验室和临床研究，一项II期临床试验公布了E75肽用于防治乳腺癌5年的研究数据。

目前报道的E75肽的制备都是通过多肽固相合成工艺获得的。固相合成有其显著的优势，操作简单并加速了多步骤的合成；但固相合成的存在主要问题是各步反应均需使用保护氨基酸、固相载体上中间体杂质无法分离，这造成最终产物含杂质较多，对分离纯化的要求更高，使得制备成本增加。固相合成的产量一般不会太高，产业化生产也不方便。此外，在多肽合成领域，不同的合成策略对终产物的纯度和收率均有很大影响。因此，目前需要一种新的E75肽合成方法，既可以保证产物的纯度和收率，又可以提高合成工艺的简便性和规模性，从而降低E75肽的生产成本。

发明内容

本发明的目的在于提供一种E75肽的液相合成方法，以解决上述背景技术中提出的问题。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

一种E75肽的液相合成方法，分别合成E75肽的3个三肽片段Boc-Lys-Ile-Phe-OH、NH₂-Gly-Ser(t-BPS)-Leu-OCH₃和NH₂-Ala-Phe-Leu-OCH₃，再将所述三肽片段依次缩合得到E75肽。

作为本发明进一步的方案：所述E75肽的液相合成方法，包括以下步骤：

(1)将Boc-Ile-OH与NH₂-Phe-OCH₃进行缩合反应得到二肽片段Boc-Ile-Phe-OCH₃，除去Boc保护基得到NH₂-Ile-Phe-OCH₃，将NH₂-Ile-Phe-OCH₃与Boc-Lys-OH进行缩合反应得到Boc-Lys-Ile-Phe-OCH₃，将其水解得到片段一Boc-Lys-Ile-Phe-OH；