[发明专利]核酸和重组质粒及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种制备骨形态发生蛋白BMP-2成熟肽的方法，该成熟肽的核酸为重组大肠杆菌Origami2表达的BMP-2成熟肽，其特征在于，该方法包括：

（1）表达：37±0.5℃条件下培养重组大肠杆菌Origami2的重组菌株至OD₆₀₀=0.6-0.8时，加入异丙基-β-d-硫代半乳糖苷至其终浓度为0.1±0.02mM，在15±0.5℃的条件下诱导培养13-15h；

所述重组大肠杆菌Origami2为含有其序列为SEQ ID NO：1所示的核酸，或者在SEQ IDNO：1的5’末端和/或3’末端连接有标签的核酸序列所示的核酸的重组质粒；

（2）纯化：将诱导培养后的细胞产物进行裂解处理，将裂解处理获得的上清液加入Ni-NTA纯化柱中进行吸附处理，随后依次使用洗涤缓冲液和洗脱缓冲液分别对Ni-NTA纯化柱进行洗涤处理和洗脱处理，收集洗脱处理得到的洗脱液。

2.根据权利要求1所述的方法，所述重组质粒为在pET30a(+)载体的KpnI和XhoI酶切位点之间插入所述的核酸而得到的表达载体。

3.根据权利要求1所述的方法，其中，在步骤（2）中，所述裂解处理包括：将诱导培养后的细胞产物与裂解缓冲液接触，随后进行超声处理；所述超声处理的条件包括：超声波破碎10±1s，停20±1s，共7-10min。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述裂解处理的条件包括：温度为2-6℃，时间为15-25min。

5.根据权利要求3所述的方法，其中，所述裂解缓冲液含有100mM NaCl和20mM Tris，pH为8；

和/或，所述洗涤缓冲液含有：500mM NaCl、20mM Tris和100mM 咪唑，pH为8；

和/或，所述洗脱缓冲液含有：500mM NaCl、20mM Tris和500mM 咪唑，pH为8。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述吸附处理的条件包括：温度为2-6℃，时间为0.1-2小时。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述洗涤处理的条件包括：温度为2-6℃，次数为2-5。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述洗脱处理的温度为2-6℃。