[发明专利]鉴定淮麦33小麦品种的方法

权利要求书

1.鉴定淮麦33小麦品种的方法，其特征是：利用SSR标记技术，通过对分布于小麦21条染色体上的800对SSR引物进行筛选，确认barc45号引物针对淮麦33品种具有较好的特异性，用于淮麦33品种的鉴定；该鉴定方法包括以下步骤：

（1）采用CTAB法，分别对淮麦33小麦品种和待测小麦品种的任何器官或组织提取DNA；

（2）以步骤（1）提取的淮麦33小麦品种和待测小麦品种的DNA为模板，以 barc45为引物序列，分别进行PCR扩增；所述barc45的正向引物序列从5'-3'为：gcgaccacctcagccaacttattatgt，所述barc45的反向引物序列从5'-3'为：gcggggaggcacattcataggagt；

（3）对步骤（2）所得PCR扩增产物进行电泳，电泳结束后显色；

（4）对步骤（3）所得显色后样品进行带型统计，对比判定：如果待测小麦品种的PCR扩增样品电泳结果与淮麦33小麦品种的PCR扩增样品结果带型一致，表明待测小麦品种为淮麦33；如果不一致，则表明待测小麦品种非淮麦33；

其中，步骤（2）中，12.5 µL PCR扩增反应体系设置如下：步骤（1）提取的DNA模板2 µL，5U/µL的Taq DNA聚合酶0.08 µL，包含Tris-HCl 100 mM、KCl 500 mM、MgCl ₂ 15 mM的10×Buffer 1.25 µL，10 mM的dNTPs0.25 µL，超纯水6.92 µL，引物barc45以10 µmol/L计，上游序列、下游序列各1 µL；所述PCR扩增程序：94℃预变性3min；94℃变性30s；62℃复性40s；72℃延伸40s，10个循环；94℃变性30s；52℃复性40s；72℃延伸40s，26个循环；最后72℃延伸5min；PCR扩增产物置于4℃保存备用。

2.如权利要求1所述鉴定淮麦33小麦品种的方法，其特征是：步骤（3）中，电泳前加入上样缓冲液，所述的上样缓冲液组分为：0.3 mol/L氢氧化钠，pH8.0的6mM EDTA，质量分数0.15%的溴酚蓝，质量分数0.25%的二甲苯青。

3.如权利要求1所述鉴定淮麦33小麦品种的方法，其特征是：步骤（3）中，凝胶电泳分析具体为：12.5µL PCR扩增反应体系中，加入2.5µL上样缓冲液；取样品3µL，200V恒定电压，在质量浓度为10%的非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳100分钟，银染显色。