[发明专利]一种利用胶体金免疫层析试纸条检测乳中TEM型β‑内酰胺酶的方法

权利要求书

1.一种利用胶体金免疫层析试纸条检测乳中TEM型β-内酰胺酶的方法，其特征在于所述方法步骤如下：步骤一：胶体金的制备及鉴定；步骤二：金标抗体的制备与纯化；步骤三：条件的优化；步骤四：试纸条性能的检测。

2.按照权利要求1所述的测序方法，其特征在于步骤一中所述的目测制得的胶体金颜色呈酒红色，透明无沉淀，质量较好；紫外扫描计算得出胶体金颗粒平均直径为20nm；透射电镜下(200nm)观察到的胶体金颗粒，大小基本一致，且分散性比较好，没有聚集现象，最终测得胶体金颗粒平均直径约为20.6nm，与紫外测得结果基本一致。

3.按照权利要求1所述的测序方法，其特征在于步骤二中所述的最适标记pH值通过添加K₂CO₃的量来确定，添加量为10μL/mL；最适标记抗体添加量为16μg/mL，制得的金标抗体离心纯化后进行紫外扫描，胶体金的最大吸收峰为523nm，金标抗体的最大吸收峰为528nm，最大吸收峰前移，因为蛋白质与胶体金发生结合，表明已标记成功且金标抗体有活性。

4.按照权利要求1所述的测序方法，其特征在于步骤三中所述的金标抗体复溶液选择第一种复溶液(1％BSA、5％蔗糖、0.05％Tween-20、0.02％叠氮钠)；单克隆抗体选择不稀释，羊抗鼠二抗稀释四倍；NC膜选用Millipore 135；金标垫选择ahlstrom8964金标垫，使用前用5％蔗糖处理；样品垫选择GF2-Ⅱ样品垫，处理液为PBS缓冲溶液(内含1％BSA、0.5％tween-20、0.05％NaN3)。

5.按照权利要求1所述的测序方法，其特征在于步骤四中所述的本实验制得的试纸条的最低检测线为6IU/mL，重复性良好，选择4℃条件贮存，至少可以储存四个月。