[发明专利]一种从辣木籽中提取辣木籽蛋白肽的方法

权利要求书

1.从辣木籽中提取辣木籽蛋白肽的方法，其特征在于包括以下步骤：

（1）高温蒸煮：将新鲜辣木籽烘干后去壳粉碎，过60目筛，在100℃条件下高温蒸煮辣木籽粉30min；

（2）高压均质：取经高温蒸煮后的辣木籽粉，按照料液比1:6 g/mL加入去离子水，以8000rpm的速率剪切10分钟，过胶体磨2次，得辣木籽匀浆液，20 MPa高压均质2次；

（3）碱法提取：在辣木籽粉匀浆液中加入氢氧化钠，调节pH值至7.0，在温度为40℃的条件下，提取40 min，冷却至室温，得混悬液；

（4）酶解：调节混悬液pH值至7.0，加入质量为辣木籽质量1%的蛋白酶，在50℃的条件下酶解18小时，90℃灭酶30 min，8000 g离心20min；分离，去除上层油脂，所得上清液为富含辣木籽蛋白肽的酶解液；所述蛋白酶由质量比为2:3的胰酶和NS37071蛋白酶的组成；

（5）分级醇沉：真空浓缩辣木籽酶解液至固形物含量30%，加入预冷至4℃的无水乙醇，使得体系中乙醇质量百分比含量达到10%，200 r/min室温匀速搅拌4h后，4000 g离心20min，得到上清液；将上清液浓缩至固形物含量30%，加入预冷至4℃的无水乙醇，使得体系中乙醇质量百分比含量达到40%，200 r/min室温匀速搅拌4h后，4000g离心20 min，得到沉淀；加入沉淀湿重8倍的去离子水，溶解后，真空浓缩，冷冻干燥，得到粉末；

（6）大孔树脂富集：将粉末溶于水中，浓度为100 mg/mL，过安伯莱特XAD-16大孔树脂柱，采用0-60 vol%乙醇溶液进行8个柱体积梯度洗脱，流速为2mL/min，具体为：1-5个柱体积采用100 vol % 水、0 vol % 乙醇洗脱；6-7个柱体积采用50 vol %水、50 vol % 乙醇洗脱；7-8 个柱体积采用40 vol % 水、60 vol % 乙醇洗脱；收集60%体积比的乙醇洗脱液，冷冻干燥，得具有强抗氧化活性的辣木籽蛋白肽1；

所得蛋白肽1中，蛋白质含量为92%，水分含量为7%，ORAC值为1455 μmol Troloxequiv/g。

2.从辣木籽中提取辣木籽蛋白肽的方法，其特征在于包括以下步骤：

（1）高温蒸煮：将新鲜辣木籽烘干后去壳粉碎，过60目筛，在105℃条件下高温蒸煮辣木籽粉40min；

（2）高压均质：取经高温蒸煮后的辣木籽粉，按照料液比1:7 g/mL加入去离子水，以9000rpm的速率剪切15分钟，过胶体磨3次，得辣木籽匀浆液，30 MPa高压均质3次；

（3）碱法提取：在辣木籽粉匀浆液中加入氢氧化钠，调节pH值至8.0，在温度为50℃的条件下，提取50 min，冷却至室温，得混悬液；

（4）酶解：调节混悬液pH值至7.5，加入质量为辣木籽质量2%的蛋白酶，在53℃的条件下酶解21小时，93℃灭酶40 min，9000g离心25min，分离，去除上层油脂，所得上清液为富含辣木籽蛋白肽的酶解液；所述蛋白酶由质量比为1:1胰酶和NS37071蛋白酶组成；

（5）分级醇沉：真空浓缩辣木籽酶解液至固形物含量35%，加入预冷至6℃的无水乙醇，使得体系中乙醇质量百分比含量达到15%，300 r/min室温匀速搅拌5h后，5000g离心25min，得到上清液；将上清液浓缩至固形物含量35%，加入预冷至6℃的无水乙醇，使得体系中乙醇质量百分比含量达到50%，300 r/min室温匀速搅拌5h后，5000g离心25min，得到沉淀；加入沉淀湿重9倍的去离子水，溶解后，真空浓缩，冷冻干燥，得到粉末；

（6）大孔树脂富集：将粉末溶于水中，浓度为150 mg/mL，过安伯莱特XAD-16大孔树脂柱，采用0-60 vol%乙醇溶液进行8个柱体积梯度洗脱，流速为2mL/min，具体为：1-3个柱体积采用100 vol %水洗脱；4-6 个柱体积采用75 vol %水、25 vol %乙醇洗脱；6-7个柱体积采用45 vol %水、55 vol % 乙醇洗脱；7-8 个柱体积采用40 vol % 水、60 vol % 乙醇洗脱；收集60%体积比的乙醇洗脱液，冷冻干燥，得具有强抗氧化活性的辣木籽蛋白肽2；

所得蛋白肽2中，蛋白质含量为91%，水分含量为7%，ORAC值为1500 μmol Troloxequiv/g。

3.从辣木籽中提取辣木籽蛋白肽的方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）高温蒸煮：将新鲜辣木籽烘干后去壳粉碎，过60目筛，在110℃条件下高温蒸煮辣木籽粉50min；

（2）高压均质：取经高温蒸煮后的辣木籽粉，按照料液比1:8 g/mL加入去离子水，以10000rpm的速率剪切20分钟，过胶体磨2次，得辣木籽匀浆液，40 MPa高压均质2次；

（3）碱法提取：在辣木籽粉匀浆液中加入氢氧化钠，调节pH值至9.0，在温度为60℃的条件下，提取60 min，冷却至室温，得混悬液；

（4）酶解：调节混悬液pH值至8.0，加入质量为辣木籽质量3%的蛋白酶，在56℃的条件下酶解24小时，96℃灭酶50 min，10000 g离心30min，分离，去除上层油脂，所得上清液为富含辣木籽蛋白肽的酶解液；所述蛋白酶由质量比为3:2的胰酶和NS37071蛋白酶组成；

（5）分级醇沉：真空浓缩辣木籽酶解液至固形物含量40%，加入预冷至8℃的无水乙醇，使得体系中乙醇质量百分比含量达到20%，400 r/min室温匀速搅拌6h后，6000 g离心30min，得到上清液；将上清液浓缩至固形物含量40%，加入预冷至8℃的无水乙醇，使得体系中乙醇质量百分比含量达到60%，400 r/min室温匀速搅拌6h后，6000 g离心30 min，得到沉淀；加入沉淀湿重10倍的去离子水，溶解后，真空浓缩，冷冻干燥，得到粉末；

（6）大孔树脂富集：将粉末溶于水中，浓度为200 mg/mL，过安伯莱特XAD-16大孔树脂柱，采用0-60 vol%乙醇溶液进行8个柱体积梯度洗脱，具体为：1-3个柱体积采用100 vol %水洗脱；4-6 个柱体积采用50 vol %水、50 vol % 乙醇洗脱； 7-8 个柱体积采用40 vol %水、60 vol % 乙醇洗脱；

收集60%体积比乙醇洗脱液，冷冻干燥，得具有强抗氧化活性的辣木籽蛋白肽3；所得蛋白肽3中，蛋白质含量为93%，水分含量为6%，ORAC值为1550 μmol Trolox equiv/g。