[发明专利]一种茄子根茎部组织的石蜡切片的制备方法

权利要求书

1.一种茄子根茎部组织的石蜡切片的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤（1）固定与软化：

选取新鲜茄子植株，截取地上1～3cm处的茎部组织和地下1～3cm处的主根组织作为石蜡切片的试验材料；

将所选的试验材料去杂，截成长为0.48～0.52cm的小段，按FAA固定液体积为试验材料体积的20倍以上计，将试验材料放入FAA固定液中，于3～5℃下固定3～5d；所述FAA固定液是每100mLFAA固定液中含福尔马林5mL、冰醋酸5mL、体积浓度为70%的乙醇90mL；

之后，在固定液中再加入体积是固定液体积5%的甘油对试验材料进行初次软化，5～7d后，将试验材料取出，放置于体积比为1：1的甘油与体积浓度为70%的乙醇混合液中，于35～38℃的暗培养箱中进行二次软化处理15d以上；

步骤（2）脱水：将经步骤（1）处理后的试验材料用体积浓度为30%的乙醇冲洗1～2次，之后将试验材料放置于体积浓度为50%乙醇中30min，取出后再依次放置在体积浓度为70%、85%、95%的乙醇中各处理2h，最后放置在纯乙醇中处理2次，每次30min；

步骤（3）透明：将经步骤（2）脱水后的试验材料置于体积比为1：1的乙醇与二甲苯的混合溶剂中1～2h，之后再置于二甲苯中两次，每次1.5～2h；

步骤（4）浸蜡：将经步骤（3）处理的试验材料浸泡于新的二甲苯中，放入38℃的烘箱中，并不断提高烘箱温度，白天每6h升高1℃，晚上每12h升高1℃，同时每2h向二甲苯中添加1～2g石蜡粉末；

当烘箱温度升至56～57℃且溶液体积达到二甲苯体积的2倍以上时，将试验材料置于石蜡液中处理3次，每次处理24h，且每更换一次石蜡液后烘箱需升温1℃，最终烘箱温度为58℃；

步骤（5）包埋：首先对包埋盒及经步骤（4）处理的试验材料进行预热，预热温度为65～71℃，之后，先在包埋盒中加入石蜡液至形成底座，石蜡液的加入量为刚刚覆盖包埋盒底部即可；3～5s后再向包埋盒中倒入能没过试验材料的石蜡液，待底座变白后将试验材料转入包埋盒中进行包埋，待石蜡液全部凝结后，将石蜡块取出，备用；

步骤（6），修蜡与切片：对步骤（5）得到的石蜡块进行修理，要求将试验材料周围多余的蜡块去除，得到切面平整、截面为矩形或梯形的试验材料蜡块；将试验材料蜡块切片，切片厚度为8～10μm；

步骤（7），展片与烤片：将蒸馏水与刷过粘片剂的载玻片进行预热，预热温度为40～42℃；然后在载玻片上滴上1mL的蒸馏水，之后将步骤（6）得到切片正面朝上放置在载玻片上展片，再用滤纸将多余的蒸馏水吸除；接着将载玻片放置在40～45℃的烘箱中进行烤片3～7d，待肉眼可见蜡带已基本融化即完成烤片；

步骤（8），脱蜡：将步骤（7）烤片后的载玻片从烘箱中拿出后立即放入二甲苯浸泡40min，再换成新的二甲苯浸泡至肉眼观察试验材料周围的蜡完全脱去；

步骤（9），复水：将经步骤（8）脱蜡后的载玻片依次放入体积比为1：1的乙醇与二甲苯的混合溶剂、纯乙醇、体积浓度为95%乙醇、体积浓度为85%乙醇、体积浓度为70%乙醇、体积浓度为50%乙醇、体积浓度为30%乙醇、体积浓度为15%乙醇、蒸馏水中，各浸泡2～3min；

步骤（10），染色：将经步骤（9）复水后的载玻片放入质量浓度为1%的番红花红T水溶液中，于29～31℃的培养箱中放置4～6h，然后依次放置于用蒸馏水、体积浓度为15%乙醇、体积浓度为30%乙醇、体积浓度为50%乙醇、体积浓度为70%乙醇、体积浓度为85%乙醇、体积浓度为95%乙醇中，各10s；接着放置于质量浓度为1%的固绿溶液中5s，再放置于纯乙醇中2次，每次2min；之后放置于体积比为1：1的乙醇与二甲苯的混合溶剂中2 min，最后放置于二甲苯中2次，每次3～6 min；

步骤（11），封片：将步骤（10）染色的载玻片在二甲苯中沾湿后，用擦镜纸擦去载玻片底部和周围多余的二甲苯，在载玻片中央滴入加拿大中性树胶，轻微晃动玻片让中性树胶与二甲苯充分混合，从载玻片一端轻放上盖玻片，放入35～40℃的烘箱中烤干，得到茄子根茎部组织的永久切片，即可观察。

2.根据权利要求1所述的茄子根茎部组织的石蜡切片的制备方法，其特征在于，步骤（1）中，去杂时，采用流水冲洗去杂。