[发明专利]一种茄子根茎部组织的石蜡切片的制备方法

说明书

本发明涉及一种茄子根茎部组织的石蜡切片的制备方法，属于生物组织学技术领域。该方法包括固定与软化、脱水、透明、浸蜡、包埋、修蜡与切片、展片与烤片、脱蜡、复水、染色、封片和观察十一大步骤。本发明方法是一种快捷、安全、实用的茄子根茎部组织石蜡切片方法，该方法得到的结果可操作性强、可重复率高、稳定可靠，镜下观察切片质量高、效果好、组织结构清晰。本方法不仅可用于研究、观察及判断茄子根茎部细胞组织的形态结构变化，从而对茄子的生理、病理和形态学进行研究，还可广泛应用于茄果类乃至其它植物的组织切片实验中，具有较好的科研应用前景。

技术领域

本发明属于生物组织学技术领域，具体涉及一种茄子根茎部组织的石蜡切片的制备方法。

背景技术

石蜡组织切片技术是组织学常规制片技术中最为广泛应用的一种方法。不仅用于观察正常细胞组织的形态结构，也是病理学和法医学等学科用以研究、观察及判断细胞组织的形态变化的主要方法，已广泛应用于众多学科领域的研究中。但由于植物的组织结构特异性，不同材料的具体操作方法也不尽相同。

目前，在茄子上开展的石蜡切片技术研究较少，且效果并不理想（切片破碎不完整且清晰度差）。因此如何克服现有技术的不足是目前生物组织学技术领域亟需解决的问题。

发明内容

本发明的目的是为了有效观察茄子根茎部的组织结构，对茄子的生理和病理进行研究，并解决现有技术的不足，提供一种茄子根茎部组织的石蜡切片的制备方法。本发明方法是在传统石蜡切片的基础上，对茄子根茎部组织开展石蜡切片技术研究，通过技术改良与创新，最终摸索出的一套简单高效、可操作性强、可重复率高、结果清晰且稳定可靠的实验技术方法。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：

一种茄子根茎部组织的石蜡切片的制备方法，包括如下步骤：

步骤（1）固定与软化：

选取新鲜茄子植株，截取地上1～3cm处的茎部组织和地下1～3cm处的主根组织作为石蜡切片的试验材料；

将所选的试验材料去杂，截成长为0.48～0.52cm的小段，放入FAA固定液中，于3～5℃下固定3～5d；

之后，在固定液中再加入体积是固定液体积5%的甘油对试验材料进行初次软化，5～7d后，将试验材料取出，放置于体积比为1：1的甘油与体积浓度为70%的乙醇混合液中，于35～38℃的暗培养箱中进行二次软化处理15d以上；

步骤（2）脱水：将经步骤（1）处理后的试验材料用体积浓度为30%的乙醇冲洗1～2次，之后将试验材料放置于体积浓度为50%乙醇中30min，取出后再依次放置在体积浓度为70%、85%、95%的乙醇中各处理2h，最后放置在纯乙醇中处理2次，每次30min，两次处理不需要间隔时间；

步骤（3）透明：将经步骤（2）脱水后的试验材料置于体积比为1：1的乙醇与二甲苯的混合溶剂中1～2h，之后再置于二甲苯中两次，每次1.5～2h，两次处理不需要间隔时间；

步骤（4）浸蜡：将经步骤（3）处理的试验材料浸泡于二甲苯中，放入38℃的烘箱中，并不断提高烘箱温度，白天每6h升高1℃，晚上每12h升高1℃，同时每2h向二甲苯中添加1～2 g石蜡粉末；

当烘箱温度升至56～57℃且溶液体积达到二甲苯体积的2倍以上时，将试验材料置于石蜡液中处理3次，每次处理24h，且每更换一次石蜡液后烘箱需升温1℃，最终烘箱温度为58℃；

步骤（5）包埋：首先对包埋盒及经步骤（4）处理的试验材料进行预热，预热温度为65～71℃，之后，先在包埋盒中加入石蜡液至形成底座，石蜡液的加入量为刚刚覆盖包埋盒底部即可；3～5s后再向包埋盒中倒入能没过试验材料的石蜡液，待底座变白后将试验材料转入包埋盒中进行包埋，待石蜡液全部凝结后，将石蜡块取出，备用；