[发明专利]一个早期评估食管癌发病风险的SNP及检测试剂盒

权利要求书

1.一种针对5-脂氧合酶c.760G＞A位点设计的引物在制备检测食管癌试剂盒中的应用，其特征在于，试剂盒包括：针对5-脂氧合酶c.760G＞A位点设计的上游等位基因特异性引物2条、下游引物1条、一对内参照引物、PCR mix和灭菌水；

所述引物序列如下：

检测食管癌的方法具体包括：外周血经细胞分离后，从白细胞中提取基因组DNA，将其浓度调至适合PCR扩增的100ng/μl工作液，每个样本做A和B两管，A管中加入野生型上游特异性引物，B管中加入突变体上游特异性引物，引物浓度均为10μM；在反应体系中先加入灭菌水5μl、PCR mix 10μl、一对内参照引物各1μl、1条上游特异性引物和一条下游引物各1μl，模板DNA 1μl，总反应体系为20μl；PCR扩增后，用2％的琼脂糖凝胶电泳30分钟，然后EB染液中浸泡30分钟，放射自显影拍照，判断是否有突变。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于使用试剂盒所检测的标本为人外周血。

3.根据权利要求1-2任一项所述的应用，其特征在于：PCR反应条件为95℃预变性5分钟，然后按95℃30秒、56℃30秒、72℃1分钟循环35次，末次循环后72℃延伸10分钟，4℃保存。