[发明专利]一种从脐带组织中提取复合细胞因子的方法

权利要求书

1.一种从脐带组织中提取复合细胞因子的方法，所述方法包括以下步骤：

1)脐带组织的处理：

将脐带组织消毒并处理为0.1～0.3cm³的组织块；

2)复合细胞因子的富集：

在步骤1)得到的组织块中加入2～5倍体积生理盐水，离心取沉淀，然后加入1～10倍体积的生理盐水，混合均匀，并置于培养箱中孵化1～6天；

3)复合蛋白因子的分离：

收集步骤2)孵化后的组织块和上清液，离心取上清液；

4)将步骤3)得到的上清液加压依次通过120μm、70μm、50μm、25μm的滤器，并进一步使用2～4KD的过滤膜浓缩脱盐，收集过滤液，即得。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤1)中，所述脐带组织保存在4℃。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤1)中，所述消毒包括以下的步骤：

将脐带组织使用碘伏浸泡1～10分钟，使用体积比为75％的酒精浸泡脱碘，然后使用生理盐水冲洗1～5次。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，在步骤1)中，将脐带组织使用碘伏浸泡1～3分钟。

5.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，在步骤1)中，将脐带组织使用碘伏浸泡1分钟。

6.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，在步骤1)中，使用生理盐水冲洗3次。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤2)中，所述离心的条件为：在1000～1400r/min下，离心4～7min。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤2)中，所述离心的条件为：在1000r/min下，离心5min。

9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤2)中，离心取沉淀后，加入2～5倍体积的生理盐水混合均匀。

10.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤2)中，离心取沉淀后，加入3倍体积的生理盐水混合均匀。

11.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤2)中，混合均匀后，首先将混匀的组织块转移至培养瓶中，然后置于培养箱中孵化。

12.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤2)中，所述培养箱的孵化条件为：

37℃、CO₂的浓度为3％。

13.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤2)中，在培养箱中孵化2～3天。

14.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤3)中，所述离心的条件为：在1000～1400r/min下，离心4～7min。

15.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤3)中，所述离心的条件为：在1400r/min下，离心5min。

16.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤4)中，将步骤3)得到的上清液加压依次通过120μm、70μm、50μm、25μm的滤器，过滤条件为进0.3～0.6mpa，温度为5±3℃。

17.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤4)中，收集通过过滤器的上清液，使用截留分子量3KD过滤膜进行浓缩脱盐。

18.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法还包括收集步骤3)离心后的脐带组织，重复使用1～3次。