[发明专利]一种从脐带组织中提取复合细胞因子的方法

说明书

本发明提供一种从脐带组织中提取复合细胞因子的方法，所述方法包括以下步骤：1)脐带组织的处理、2)复合细胞因子的富集、3)复合蛋白因子的分离、4)将步骤3)得到的上清液加压过滤，并进一步使用3KD浓缩脱盐，既得。本发明还提供了一种从脐带组织中提取的复合细胞因子。本发明直接从脐带组织中获得复合细胞因子，这些复合细胞因子均为人体成分，可以直接被皮肤吸收，避免过敏反应，无副作用。本发明的方法不涉及高温及化学灭菌的方式，仅仅利用过滤法去除微生物污染，既避免了产品出现污染变质问题，又保证生物活性成分不被高温、辐射或化学杀菌剂改变结果，保证了产品中细胞因子的活性，使产品效果稳定。

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及一种从脐带组织中提取复合细胞因子的方法，本发明还涉及本发明提取的复合细胞因子的保存方法及其用途。

背景技术

细胞因子是一类通过与特异的、高亲和的细胞膜受体结合，调节细胞生长并参与细胞功能等多效应的多肽类物质，对不同种类细胞具有一定的专一性，由多种维生素、氨基酸、多醣类成分、复杂蛋白质体、醣蛋白等组成。细胞因子由正常细胞分泌，分泌方式主要包括自分泌(autocrine)和旁分泌(paracrine)，具有多效性、重叠性、协同性、拮抗性和双重性等特点，该特点是其具有非常重要实验研究价值，有助于阐明分子水平的免疫调节机理，有助于疾病的预防、诊断和治疗，特别是利用基因工程技术生产的重组细胞因子已用于治疗肿瘤、感染、炎症、造血功能障碍等。目前实验研究结果表明其可应用于细胞培养和3D打印的生物材料，具有抗衰老和免疫调节等作用，未来具有非常广阔的应用前景。

间充质干细胞(Mesenchymal stem cells)是一类具有多向分化潜能的成体干细胞，源于发育早期的中胚层，主要存在于结缔组织和器官间质中，可以从骨髓、外周血、脂肪及皮肤等多种组织中获得。间充质干细胞属于非终末分化细胞，它既有间质细胞的特征，又有内皮细胞及上皮细胞的特征；作为一类多能干细胞，它在体外特定的诱导条件下，可以向骨、软骨、肌肉、肌腱、肝、脂肪、神经、内皮及胰岛样细胞等方向增殖分化。目前已知对心肌梗死、糖尿病、骨质疏松、骨坏死、狼疮性肾炎、肝硬化、肝衰竭、多发性肝硬化症、系统性红斑狼疮、帕金森病、脊髓损伤等都有一定治疗效果。

近来有学者从分娩后的废弃物-脐带中分离培养出间充质干细胞，并进行了形态学、分化功能和表面标志物等生物学表型鉴定，确定了这种新型间充质干细胞的开发潜质。这种新型间充质干细胞与骨髓间充质干细胞相比具有明显的优势：(1)来源充足，取材方便，无伦理学争议；(2)含量丰富，可在体外进行分离、培养，且生物学性状稳定，多次传代扩增仍能保持旺盛功能；(3)免疫原性极低；(4)分泌能力强，在增殖生长过程中会产生大量细胞因子等。

目前，从脐带中获得的间充质干细胞除应用于临床研究与治疗外，干细胞分泌产生的各种多肽类细胞因子也越来越被关注。在干细胞的培养液中含有多种干细胞分泌的细胞因子，如干细胞因子(SCF)、肝细胞生长因子(HGF)、神经生长因子(NGF)、基质细胞源性生长因子(SDF)、血管内皮细胞生长因子(VEGF)、血小板源性生长因子(PDGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、胰岛素样生长因(IGF)、表皮生长因子(EGF)、白细胞介素(IL)、巨核细胞集落刺激因子(M-CSF)、肿瘤坏死因子(TNF)、干扰素(IFN)等，通过多种因子的协同作用可有效调控机体细胞信号传导、活化人体干细胞，进而生理性修复或替代机体损伤、病变及衰老的细胞等。

美国科学家LEVI博士就发现干细胞分泌的细胞因子具有除皱作用，将多种细胞因子组成的生物活性复合蛋白作用于皮肤真皮层的成纤维干细胞，使处于休眠、损伤的成纤维干细胞被激活和修复，并分化成大量成熟的成纤维细胞用于皮肤更新。