[发明专利]一种活性多肽SPGP‑V的制备方法

权利要求书

1.一种从广西捕鸟蛛粗毒中制备新型生物活性多肽蜘蛛抑钙肽-V（SPGP-V）的方法，其特征在于，所述方法包括：

（1）将粗毒干粉用双蒸水溶解配成10mg/mL的毒素溶液，12 000rpm离心5 min,置于4℃保存；粗毒上样阳离子交换HPLC进行第一步分离；采用预装柱进行分离；486检测器检测，检测波长为 215nm；流动相为四相洗脱系统，流速为3 mL/min；洗脱液分别为A相0.1M磷酸二氢钠, B相0.1M 磷酸氢二钠, C相 1M氯化钠, D相双蒸水（ddH₂O）；其中A液和B液用来调节洗脱液的pH值，采用氯化钠梯度洗脱；上述经阳离子交换 HPLC分离后收集的各洗脱峰分别上样反相HPLC进行进一步纯化；反相高效液相色谱分离脱盐纯化：在Pharmacia公司的AKTA蛋白纯化系统上完成，采用大连依利特公司的C18反相制备柱；

第三步分析型Waters 2690 高效液相色谱仪上进行梯度洗脱，采用分析型Vydac C18 RP-HPLC反相柱 (218TP54, 4.6×250 mm) 于996检测器检测，检测波长为280nm，流动相为含0.1%TFA的水（A）和乙腈（B），洗脱速度为1mL/min，柱温为40℃；

（2）通过上述阳离子交换HPLC以及两步反相HPLC共三步分离获得的SPGP-V，运用质谱鉴定纯度达到98%以上，其分子量约为4111.7 Da，经序列测定，该多肽的一级结构由35个氨基酸残基组成，其中含6个半胱氨酸并形成三对二硫键，C-端未酰胺化；多肽SPGP-V纯化冻干粉的理化性状为白色或类白色疏松体，无气味，极易溶解于水，水溶液近于无色透明。

2.根据权利要求1所述的制备方法，所述的生物活性多肽为蜘蛛抑钙肽-V（SPGP-V），其氨基酸序列为：

NH₂-Glu Cys Arg Trp Tyr Leu Gly Gly Cys Ser Gln Asp Gly Asp Cys Cys Lys

His Leu Gln Cys His Ser Asn Tyr Glu Trp Cys Val Trp Asp Gly Thr Phe Ser-OH。