[发明专利]一种反胶团包合胰岛素体系的制备方法

说明书

技术领域

本发明属于胰岛素口服制剂制备技术领域，具体涉及一种反胶团包合胰岛素体系的制备方法。

背景技术

胰岛素是胰岛素依赖型(1型)与严重的胰岛素非依赖型(2型)糖尿病最有效的治疗药物之一。胰岛素治疗患者一般需终生用药，而长期皮下注射带来了诸多的不便和巨大的痛苦。因此，广大科研工作者一直致力于研制非注射型的胰岛素制剂。其中，口服胰岛素制剂是目前公认最理想的非注射临床给药方式。胰岛素药物的口服剂型主要需要克服肠黏膜上皮存在的对多肽蛋白质类药物的吸收屏障，还需要使胰岛素避免被胃肠道的各种蛋白酶分解、消化。

在过去的几十年中对于克服常规口服胰岛素的缺点和限制做了各种不同的尝试。主要集中在口服胰岛素的研制取得成功将要克服酶的降解、提高上皮细胞的渗透率以及在处理加工中保存药物的生物活性等方面。目前主要在脂质体、纳米粒、乳剂、油相溶液及其他剂型等方面研究。

发明内容

本发明要解决的技术问题是克服现有口服胰岛素的缺陷和技术不足，在不牺牲植物多酚分子优异的生理、生物活性功能的前提下，通过植物多酚脂肪酸酯化合成新型表面活性剂，制备搭载胰岛素的反胶团口服运输系统。不仅细胞能够吸收，在有效的解决胰岛素口服运输过程中保存生物活性的同时，能够有效控制糖尿病患者的血糖。

本发明解决技术问题所采用的技术方案为：

一种反胶团包合胰岛素体系的制备方法，首先以植物多酚和脂肪酰氯为原料，通过酯化反应将脂肪链连接到植物多酚的羟基上，合成植物多酚脂肪酸酯。紧接着以植物多酚脂肪酸酯作为表面活性剂，配置反胶团体系(包含表面活性剂、水相、有机相，其中有机相为花生油、玉米油、液体石蜡中的一种)。然后将反胶团体系与胰岛素按照一定比例震荡混合，植物多酚通过氢键、疏水键与胰岛素蛋白发生可逆络合作用，将胰岛素保护在反胶团的“水池”中，得到搭载胰岛素的反胶团体系。

一种反胶团包合胰岛素体系的制备方法，具体包括以下步骤：

表面活性剂合成：称取植物多酚、10倍植物多酚质量的1,4‐二氧六环，加入反应容器中，搅拌使其溶解，升温至40～60℃后，通入氮气，加入吡啶，再滴加脂肪酰氯，定时用pH试纸在冷凝管口检测，至HCl不再生成(pH值不变)时停止反应，反应完毕后，用水洗涤三次，洗除催化剂和未反应的植物多酚，分去水层后，加入吸水剂去除微量水分，减压浓缩，低温下真空蒸除溶剂，再于高真空度干燥箱中干燥，得化学改性产物植物多酚脂肪酸酯乳化剂；所述脂肪酰氯可以结合在植物多酚分子中的任何一个或多个羟基位置，植物多酚分子上的羟基结合的脂肪酰氯分子可以相同或者不同。

反胶团体系配制：将步骤(1)所得表面活性剂和助溶剂甘油加入到有机试剂中，搅拌至表面活性剂完全溶解，再加入水，使体系Wo值＝15～35，表面活性剂浓度为200～300mM，静置所得溶液即为反胶团体系；

胰岛素溶液配置：将胰岛素加入到0.01～0.02M的HCl水溶液中充分溶解，使胰岛素的浓度为2.6～3.4g/l，得到胰岛素溶液；

(4)胰岛素置换过程：将步骤(3)配置的胰岛素溶液与步骤(2)配置的反胶团体系于摇床震荡混合5～40min后，静置分层后取有机相，即得反胶团包合胰岛素体系，后续可以做成软胶囊等终剂型。

有研究表明，植物多酚可以增强胰岛素活性。在一个体外的附睾组织细胞检测中茶被证明至少增加胰岛素15倍的活性，且活性成分主要是表没食子儿茶素没食子酸酯，其次是表儿茶素没食子酸酯(Richard A.Anderson,et al(2002)J.Agric.Food Chem.50:7182‐7186)。由于天然植物多酚的分子结构中含有大量的酚轻基，其易溶于水而难溶于油。因而，在不牺牲植物多酚分子优异的生理、生物活性功能的前提下，可以通过分子结构的改变来达到其在油脂性环境中具有较大溶解度的目的。参照表面活性剂的增溶原理，在植物多酚的分子结构中引入脂肪链，合成的植物多酚脂肪酸酯符合表面活性剂的特征，一端为亲水基团，另一端为疏水基团。

利用表面活性剂植物多酚脂肪酸酯乳化剂在有机相中形成的反胶团，反胶团在有机相内形成一个亲水微环境，使蛋白质类生物活性物质溶解于其中，从而避免在有机相中发生不可逆变性。

作为优选，步骤(1)所述植物多酚选自茶多酚、葡萄籽多酚和单宁酸中的一种。

作为优选，步骤(1)所述植物多酚与脂肪酰氯物质的量之比为1:1～20。

作为优选，步骤(1)所述植物多酚与吡啶的质量之比为1:0.5～1.4。