[发明专利]一种用于检测德尔卑沙门氏菌的靶基因、特异性引物对及检测方法和试剂盒

说明书

本发明提供一种用于检测德尔卑沙门氏菌的靶基因、特异性引物对及检测方法和试剂盒。本发明特异性引物对是根据5个德尔卑沙门氏菌特异性检测靶点设计而成，检测靶点稳定高、特异性强，本发明提供的检测方法包括：提取样品DNA，PCR扩增；凝胶电泳检测扩增产物；比较电泳后条带。通过实验比较分析，本发明方法具有单一性强，检测结果可靠，结果判定简单的特点，可以广泛应用于食品卫生领域。

技术领域

本发明涉及分子生物学及生物检测技术领域，涉及一种用于检测德尔卑沙门氏菌的靶基因、特异性引物对及检测方法和试剂盒。

背景技术

德尔卑沙门氏菌(Salmonella Derby)是引起人类感染的主要沙门氏菌血清型之一，此血清型菌株的主要宿主为人类。德尔卑沙门氏菌可存活在畜禽体内，一旦畜禽的粪便或携带此病菌的生肉污染了食品及加工场所，在温度适宜的环境下，此菌就会迅速的生长繁殖，当菌数在食品中达到一定数量，被食用后就会造成食物中毒，危害人的身心健康，严重者甚至危及生命。郑华英、周敦金等在2003年《一起德尔卑沙门氏菌污染水源引起的肠道传染病暴发流行的调查》中显示，武汉市一个村庄因为饮用了未经消毒的井水后，陆续出现了上吐下泻、腹痛发热等症状，随后检验人员进行了取样检验分析，发现该次事故是由于德尔卑沙门氏菌感染而引起。谢春平等在2013年《合肥地区五类食品沙门氏菌污染情况调查分析》中发现，合肥地区常见五类食品 (生肉、水产品、卤菜、乳制品、发酵豆制品)的沙门氏菌污染调查表明，在以上食品中共检测出沙门氏菌22株，其中德尔卑沙门菌占到 45.6％。国家质量监督检验检疫总局的2002年第25和26号令中明确规定沙门氏菌为必检项目。目前，随着分子生物学的不断发展尤其是聚合酶链式反应(PCR)的发展，通过分子技术检测鉴定沙门氏菌血清型变得更加可靠。

现有技术中，德尔卑沙门氏菌检测主要使用传统的培养方法，整个检测过程步骤较多，时间较长，一般需要4-6个工作日，而且干扰的因素较多，检测结果的判定较复杂，给食品检测带来非常不利的影响。而且用于德尔卑沙门氏菌的PCR检测的靶基因研究较少且主要是由于没有合适的检测靶点。

发明内容

针对现有技术不足，本发明提供一种用于检测德尔卑沙门氏菌的靶基因、特异性引物对及检测方法和试剂盒，解决了现有技术中德尔卑沙门氏菌检测结果判定复杂、检测周期长的技术问题。

为实现以上目的，本发明通过以下技术方案予以实现：

一种用于检测德尔卑沙门氏菌的靶基因，RU61_00441、 RU61_00445、RU61_00447、RU61_RS09205、RU61_RS06985， RU61_00441具有如SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列或其特异性片段， RU61_00445具有如SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列或其特异性片段， RU61_00447具有如SEQ ID NO.3所示的核苷酸序列或其特异性片段， RU61_RS09205具有如SEQID NO.4所示的核苷酸序列或其特异性片段，RU61_RS06985具有如SEQ ID NO.5所示的核苷酸序列或其特异性片段。

用于扩增所述靶基因的特异性引物对，所述特异性引物对分别为： SD1、SD2、SD3、SD11和SD12，其中，

SD1-f：核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示、SD1-r：核苷酸序列如 SEQ ID NO.7所示；

SD2-f：核苷酸序列如SEQ ID NO.8所示、SD2-r：核苷酸序列如 SEQ ID NO.9所示；

SD3-f：核苷酸序列如SEQ ID NO.10所示、SD3-r：核苷酸序列如 SEQ ID NO.11所示；

SD11-f：核苷酸序列如SEQ ID NO.12所示、SD3-11：核苷酸序列如SEQ ID NO.13所示；