[发明专利]一种用于绝对定量检测猪繁殖与呼吸综合征病毒的ddPCR方法、引物及其应用和试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及生物检测技术领域，具体而言，涉及一种用于绝对定量检测猪繁殖与呼吸综合征病毒的ddPCR方法、引物及其应用和试剂盒。

背景技术

猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus，PRRSV)感染可以引起猪繁殖与呼吸综合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome，PRRS)。PRRS的主要特征症状是引起母猪的繁殖障碍(包括怀孕母猪的流产，产死胎、木乃伊胎和弱仔等)及各个年龄段猪的间质性肺炎性呼吸障碍等。该病最早是1987年发现于美国，1995年首次在我国出现，此后在全国大部分省市蔓延，目前已成为危害我国养猪业的最重要传染病之一，给我国养猪业造成了严重的经济损失。特别是2006年爆发的由Nsp2基因部分缺失的高致病性PRRSV变异株(Highly pathogenic PRRSV，HP-PRRSV)感染引起的以高热、高发病率和高死亡率为特征的“无名高热”，更是给我国养猪业造成了十分惨重的损失。及时、准确地诊断该病，是采取有效防控措施、减少经济损失的基础。国际上根据PRRSV的分离地、抗原性、致病性和基因组的差异将PRRSV分为美洲型和欧洲型，而我国主要流行的为美洲型毒株。目前，我国流行的PRRSV又包括经典美洲株和高致病性美洲株。另外，PRRSV的病毒含量可以反应猪群的整体感染状况。因此临床上急需一种能够快速定量检测PRRSV的方法。

传统的检测PRRSV的方法包括病毒的分离与鉴定、病毒中和试验(virus neutralization test，VNT)、免疫过氧化物酶单层试验(immunoperoxidase monolayer assay，IPMA)、间接免疫荧光抗体实验(indirect immunofluorescent antibody test，IFA)、免疫组织化学技术(immunohistochemistry，IHC)、酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)及胶体金免疫层析技术(gold immunochromatography assay，GICA)等。这些方法基本都非常耗时耗力而且敏感性较低，不太适合临床上大批样本的检测。随后发展起来的反转录PCR(reverse transcriptase polymerase chain reaction，RT-PCR)和荧光定量PCR(Real time RT-PCR)等分子生物学技术与传统方法相比具有特异性强、灵敏性高、检测时间短及重复性好等优点。但是这些方法均是对病毒的定性或半定量检测，而且实验结果判断依赖于检测人员丰富的经验，在特异性和敏感性上依旧存在一定局限性，容易出现假阴性和假阳性结果。

发明内容

本发明的目的在于提供一种用于绝对定量检测猪繁殖与呼吸综合征病毒的ddPCR方法。

本发明的另一目的在于提供一种用于绝对定量检测猪繁殖与呼吸综合征病毒的引物。

本发明的另一目的在于提供上述引物在猪繁殖与呼吸综合征病毒的绝对定量检测中的应用。

本发明的另一目的在于提供上述引物在猪繁殖与呼吸综合征病毒的早期诊断和/或防疫中的应用。

本发明的另一目的在于提供一种用于绝对定量检测猪繁殖与呼吸综合征病毒的试剂盒。

本发明是这样实现的：

一种用于绝对定量检测猪繁殖与呼吸综合征病毒的ddPCR方法，其包括：

将PCR预混液形成微滴，并进行ddPCR反应；

其中，上述PCR预混液含有SEQ ID NO:1所示的正向引物和SEQ ID NO:2所示的反向引物。

一种用于绝对定量检测猪繁殖与呼吸综合征病毒的引物，其包括SEQ ID NO:1所示的正向引物和SEQ ID NO:2所示的反向引物。

上述用于绝对定量检测猪繁殖与呼吸综合征病毒的引物在猪繁殖与呼吸综合征病毒的绝对定量检测中的应用。

上述用于绝对定量检测猪繁殖与呼吸综合征病毒的引物在猪繁殖与呼吸综合征病毒的早期诊断和/或防疫中的应用。

一种用于绝对定量检测猪繁殖与呼吸综合征病毒的试剂盒，其包括上述用于绝对定量检测猪繁殖与呼吸综合征病毒的引物。

与现有技术相比，本发明的有益效果是：