[发明专利]一种蛋白制剂及在CIK细胞培养方面的应用

说明书

本发明公开了一种蛋白制剂及在CIK细胞培养方面的应用，该蛋白制剂为树突状细胞的总蛋白，在提取树突状细胞的总蛋白之前，对树突状细胞进行高浓度CO₂刺激，高浓度指CO₂占空气体积分数＞5％。本发明提供的蛋白制剂可用于诱导制备具有高效杀瘤活性的CIK细胞，可用于替代组合复杂、成本较高的外源性细胞因子，提高培养便捷性，降低成本。

技术领域

本发明属于细胞免疫领域，涉及CIK细胞，具体涉及一种蛋白制剂及在CIK细胞培养方面的应用。

背景技术

肿瘤的生物免疫治疗作为第四种治疗手段日益受到重视。细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine-induced killer cell，CIK)是近年来发现的一种非常有前景的过继免疫细胞，具有增殖迅速、杀瘤活性广谱且高效、毒副作用微小等优点，已经成为肿瘤生物免疫治疗的主力军。CIK细胞的主要效应细胞为CD3+CD56+表型T淋巴细胞，兼有NK细胞和T细胞的特征。在功能上，CIK一方面拥有T淋巴细胞强大的抗肿瘤活性，另一方面还拥有NK细胞非MHC限制性的杀伤肿瘤的特点，其增殖迅速、对正常造血影响轻微。

CIK细胞的增殖和细胞毒活性依赖于培养条件的刺激。培养高纯度CD3+CD56+细胞是提高CIK细胞毒活性、增强对肿瘤细胞杀伤的关键。

现有技术通常都是通过在培养基中添加多种外源性细胞因子进行诱导刺激。

发明内容

本发明的目的在于提供一种蛋白制剂，以替代组合复杂、成本较高的外源性细胞因子，以诱导制备具有高效杀瘤活性的CIK细胞。

本发明通过如下技术方案得以实现：

一种蛋白制剂，为树突状细胞的总蛋白，在提取所述树突状细胞的总蛋白之前，对树突状细胞进行高浓度CO₂刺激；所述高浓度指CO₂占空气体积分数＞5％。

优选地，高浓度指CO₂占空气体积分数25-45％。

优选地，高浓度CO₂刺激时间为2-4小时。

上述蛋白制剂在培养扩增CIK细胞方面的应用。

本发明优点：

本发明提供的蛋白制剂可以用于诱导制备具有高效杀瘤活性的CIK细胞，可以用于替代组合复杂、成本较高的外源性细胞因子，提高培养便捷性，降低成本。

附图说明

图1为各组CIK细胞对SMMC-7721细胞的杀伤率(A为效靶比10:1，B为效靶比20:1)。

具体实施方式

为了更好地解释本发明的技术方案，下面结合具体实施例进一步介绍。实施例中未特别强调的实验材料均为常规实验材料，属于本领域技术人员易于获得的范畴。

RPMI-1640培养基和胎牛血清均为Gibco产品。

实施例1：总蛋白的制备

1、单个核细胞的分离：采集健康志愿者外周血20mL，预冷的PBS 1:1稀释，缓慢加入淋巴细胞分离液上层，650g，4℃离心20min，收集白色细胞层，分离单个核细胞，1640培养基重悬细胞后置于37℃、5％CO₂孵箱中孵育2h。

2、树突状细胞(DC细胞)的培养：单个核细胞培养2h后收集贴壁细胞，在完全培养基(1640+10％FBS)中添加GM-CSF(1000U/mL)、IL-4(1000U/mL)诱导DC生成，于37℃、5％CO₂孵育箱中培养，每2天半量换液一次，换液后补充GM-CSF、IL-4，于第6d在培养基中添加TNF-α诱导DC成熟(100ng/mL)，连续培养7d。