[发明专利]一种用于不贴壁细胞免疫染色的染色管及染色方法

权利要求书

1.一种用于不贴壁细胞免疫染色的染色管，其特征在于，设有外管、内管和密封盖；所述的外管设有外管管体；所述的内管设有内管管体、支撑台和滤膜；所述的内管管体底面为开口状，内管管体包括隔离管体和位于隔离管体下方的染色管体，且内管管体的侧壁上设有通气窗；所述的支撑台位于内管管体的上端端面上，且外径大于内管管体的外径；所述的滤膜孔径为0.5-1.5μm且外缘固定在内管管体的内壁上；所述的密封盖设有连接部和盖体，所述的连接部一端连接外管，另一端连接盖体；装配状态下，所述的内管管体套接在外管管体内，所述的支撑台由外管管体的上端面支撑住，所述的隔离管体使染色管体与外管管体之间留有间隙，所述的通气窗连通内管管体与所述间隙，所述的盖体卡扣在内管管体上，将培养基中悬浮的细胞加入到内管管体部分，低速离心去除培养基，移除废液；向内管管体中加入固定液，固定细胞，完毕后低速离心去除固定液，移除废液；向内管管体中加入 Triton溶液，打孔穿透细胞，完毕后低速离心去除 Triton 溶液，移除废液；然后封闭、一抗孵育、一抗洗涤、二抗孵育、二抗洗涤、DAPI 复染，以此类推，每一步均低速离心去除废液。

2.根据权利要求1所述的染色管，其特征在于，所述的通气窗设于隔离管体上。

3.根据权利要求1所述的染色管，其特征在于，所述的隔离管体为由上至下直径逐渐缩小的圆台柱状。

4.根据权利要求1所述的染色管，其特征在于，所述的通气窗围绕内管的纵向中心轴呈对称辐射状排布。

5.根据权利要求1所述的染色管，其特征在于，所述的外管管体的上端端面设有支撑台面，所述的支撑台面的外径大于外管管体的外径；装配状态下，所述的支撑台由所述支撑台面支撑住。

6.根据权利要求1所述的染色管，其特征在于，所述的外管管体上段为圆柱状，下段为圆锥状。

7.根据权利要求1所述的染色管，其特征在于，所述的连接部上设有弯折部。

8.根据权利要求1所述的染色管，其特征在于，所述的盖体上设有手柄。

9.一种用于不贴壁细胞的免疫染色方法，其特征在于，所述的免疫染色方法使用了权利要求1-8任一所述的染色管。

10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，所述的免疫染色方法包括以下步骤：

a）将培养基中悬浮的细胞加入到内管管体中，离心去除培养基，移除废液；

b）向内管管体中加入固定液，固定细胞，完毕后离心去除固定液，移除废液；

c）向内管管体中加入Triton溶液，打孔穿透细胞，完毕后离心去除Triton溶液，移除废液；

4）然后封闭、一抗孵育、一抗洗涤、二抗孵育、二抗洗涤、DAPI复染，每一步处理后均离心去除废液；

5）免疫染色完成后，拿出内管，直接置于细胞培养板，在细胞培养板中加入适量PBS缓冲液或甘油封片剂，使之覆盖内管底部的滤膜，放置在倒置显微镜下观察染色。