[发明专利]Clean‑CL纯化试剂盒及其应用

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及Clean-CL纯化试剂盒及其应用。

背景技术

自从DNA的双螺旋结构被人们解析开始，人们在探究健康与疾病的基因组的复杂性与差异性上做出了巨大的努力。为了支持人类基因组计划的顺利进行，人们在仪器和试剂上做出了巨大的改进。该计划的完成使得人们强烈的意识到人们需要更多更好的技术与数据分析能力来回答随之而来的一系列生物学问题。然而，通量的限制以及居高不下的测序成本成为了人们进一步了解基因组的一道坎。2000年之后推出的高通量测序平台很好地解决了这个问题，人类基因组测序的成本直接因此下降50000倍，并且由此产生了一个新的名词：下一代测序(next-generation sequencing，NGS)。在过去的十年中，NGS技术不停的在进步——测序的数据量增加了100-1000倍。这些技术上的进展使得人们甚至可以在一条read上读出整条基因组序列。根据VeritasGenomics的数据，人类基因组测序的成本也已经下降到1000美元/人。不仅如此，该技术已经广泛在临床诊断上得到应用。

高通量测序技术的流程大致分为基因组DNA提取、文库构建、上机测序和数据解读。而其中的文库构建，以现在普遍的技术是需要进行磁珠纯化的，主要目的是去掉引物二聚体和杂质等。现有进口磁珠纯化试剂因其高昂的价格使得整体人类基因组检测成本提高。

发明内容

本发明的一个目的是提供一种磁珠纯化试剂。

本发明提供的磁珠纯化试剂是将羧酸盐磁珠Speed Bead Magnetic CarboxylateModified Particles、Tris-HCL溶液、EDTA溶液、氯化钠、聚乙二醇和水混匀得到的溶液。

上述试剂中，所述羧酸盐磁珠Speed Bead Magnetic Carboxylate ModifiedParticles、所述Tris-HCL溶液、所述EDTA溶液、所述氯化钠和所述聚乙二醇的配比为205ul:(80-120)ul:(15-25)ul:(1-1.3)g:(1.5-2.2)g。

上述试剂中，所述羧酸盐磁珠Speed Bead Magnetic Carboxylate ModifiedParticles、所述Tris-HCL溶液、所述EDTA溶液、所述氯化钠和所述聚乙二醇的配比具体为205ul:100ul:20ul:1.17g:1.8g。

上述试剂中，

所述聚乙二醇为聚乙二醇11000；

所述Tris-HCL溶液的浓度为1M；

所述EDTA溶液的浓度为0.5M；

所述水为灭菌纯化水。

在本发明的具体实施例中，10ml的磁珠纯化试剂是将205ul羧酸盐磁珠SpeedBead Magnetic Carboxylate Modified Particles、100ul Tris-HCL溶液、20ul EDTA溶液、1.17g氯化钠和1.8g聚乙二醇混匀，灭菌纯化水定容至10ml得到的。

本发明的另一个目的是提供上述磁珠纯化试剂的制备方法。

本发明提供的上述磁珠纯化试剂的制备方法包括如下步骤：

(1)将羧酸盐磁珠Speed Bead Magnetic Carboxylate Modified Particles至于离心管中；向所述离心管中加入Tris-HCL溶液、EDTA溶液和水，混匀，得到体系甲；

(2)向所述体系甲中加入氯化钠和聚乙二醇，混匀，得到体系乙；

(3)向所述体系乙中加入水，混匀，孵育，得到磁珠纯化试剂。

上述方法中，所述羧酸盐磁珠Speed Bead Magnetic Carboxylate ModifiedParticles、所述Tris-HCL溶液、所述EDTA溶液、所述氯化钠和所述聚乙二醇的配比为205ul:(80-120)ul:(15-25)ul:(1-1.3)g:(1.5-2.2)g；在本发明的具体实施例中，所述Speed Bead Magnetic Carboxylate Modified Particles、所述Tris-HCL溶液、所述EDTA溶液、所述氯化钠和所述聚乙二醇的配比具体为205ul:100ul:20ul:1.17g:1.8g。

上述方法中，

所述聚乙二醇为聚乙二醇11000；

所述Tris-HCL溶液的浓度为1M；所述Tris-HCL溶液的pH为8.0；

所述EDTA溶液的浓度为0.5M；