[发明专利]一种从海洋球石藻中提取叶绿醇的方法

权利要求书

1.一种从海洋球石藻中提取叶绿醇的方法，其特征在于：包括以下步骤：

步骤一、制备海洋球石藻乙酸乙酯相萃取物：先用乙醇溶液浸提，获得乙醇浸膏，再以乙酸乙酯为萃取剂进行萃取处理，合并萃取液，减压浓缩得到海洋球石藻乙酸乙酯相萃取物；

步骤二、反相硅胶柱层析制备叶绿醇一次粗品：将获得的海洋球石藻乙酸乙酯相萃取物以反相硅胶柱进行层析处理，收集，检测、合并、减压浓缩至干，得到叶绿醇一次粗品；

步骤三、反相硅胶柱层析制备叶绿醇二次粗品：将获得的叶绿醇一次粗品以反相硅胶柱进行层析处理，收集，检测、合并、减压浓缩至干，得到叶绿醇二次粗品；

步骤四、将叶绿醇二次粗品用适量甲醇溶解后，上葡聚糖凝胶柱Sephadex LH-20，用甲醇作为洗脱剂进行洗脱，流速控制8S/drop，使用自动收集器收集各馏分，每30min收集一管，初步用TLC分析流出物，合并142至167管的馏分，减压浓缩至干，获得叶绿醇一次精品；

步骤五、正相硅胶柱层析制备叶绿醇二次精品：将叶绿醇一次精品经过正相硅胶柱层析，用硅胶粉拌样，硅胶用石油醚饱和后装柱，样品上柱后用正己烷乙醚的体系进行洗脱，所述正己烷和乙醚的体积比为9:1，收集馏分，合并9-15管，减压浓缩至干，获得叶绿醇二次精品；

步骤六、PTLC制备叶绿醇：将获得的叶绿醇二次精品进行PTLC，点样、展开，刮板，样品回收，保存于-20℃，得到叶绿醇纯品。

2.如权利要求1所述的一种从海洋球石藻中提取叶绿醇的方法,其特征在于：所述步骤一的具体方法为：海洋球石藻生长至稳定期，收获，冷冻干燥获得海洋球石藻藻粉，用质量分数为75％的乙醇溶液浸提，获得乙醇浸膏，加入等体积的乙酸乙酯和水，反复萃取，收集乙酸乙酯相，合并、减压浓缩至干，获得海洋球石藻乙酸乙酯相萃取物。

3.如权利要求1所述的一种从海洋球石藻中提取叶绿醇的方法,其特征在于：所述步骤二的具体方法为：将海洋球石藻乙酸乙酯相萃取物用适量的分析纯甲醇溶解，加入量以甲醇正好没过萃取物为宜，进行反相硅胶柱层析；依次用水，质量分数为25％的甲醇溶液，质量分数为50％的甲醇溶液，质量分数为75％的甲醇溶液，甲醇洗脱，每个梯度洗脱1.5L，流速控制为30mL/min，每200mL收集1管，旋蒸，初步用TLC分析流出物，合并叶绿醇高浓度流分段，减压浓缩至干，获得叶绿醇一次粗品。

4.如权利要求1所述的一种从海洋球石藻中提取叶绿醇的方法,其特征在于：所述步骤三的具体方法为：将叶绿醇一次粗品，依次采用质量体积分数为65％，70％，75％，80％，85％的甲醇溶液梯度进行反相硅胶柱层析，每个梯度洗脱300mL，流速控制为30mL/min，每200mL收集1管，旋蒸，初步用TLC分析流出物，合并叶绿醇高浓度流分段，减压浓缩至干，获得叶绿醇二次粗品。

5.如权利要求1所述的一种从海洋球石藻中提取叶绿醇的方法,其特征在于：所述步骤六的具体方法为：将叶绿醇二次精品经过PTLC，最终得到叶绿醇：采用高效薄层层析板，在体积比为：石油醚：乙酸乙酯＝8：1的展开剂中展开，前后两端显色，用刀片刮取中间部分，合并，用甲醇溶解，高速离心，收集上清液，减压浓缩至干，最终得到叶绿醇。