[发明专利]一种利用真核表达系统制备HIV‑1gp120的方法在审
| 申请号： | 201710371571.X | 申请日： | 2017-05-24 |
| 公开（公告）号： | CN107513536A | 公开（公告）日： | 2017-12-26 |
| 发明（设计）人： | 欧卫军;沙海;花娟;王蕾;牛青青 | 申请（专利权）人： | 南通伊仕生物技术股份有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85;C07K14/16;C07K1/22 |
| 代理公司： | 南京正联知识产权代理有限公司32243 | 代理人： | 吴惠松 |
| 地址： | 226001 江苏省南通市南*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 利用 表达 系统 制备 hiv gp120 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种利用真核表达系统制备HIV-1gp120的方法，其特征在于：步骤如下：
A、利用大肠杆菌体外表达系统，获得pFastBac-Ysgp3质粒；
B、利用上述灭活质粒转染昆虫sf9细胞，待细胞病变后收集P1代病毒上清；
C、利用P1代病毒上清再次感染昆虫sf9细胞，获得P2代病毒上清；
D、重复C步骤，依次获得P3、P4代病毒上清；
E、用P4代病毒上清感染昆虫sf9细胞，在gp120表达量出现峰值的时候收集细胞，获得gp120蛋白；
F、纯化gp120蛋白。
2.根据权利要求1所述的一种利用真核表达系统制备HIV-1gp120的方法，其特征在于：步骤A中大肠杆菌为DH10Bac细胞，HIV-1gp120杆状病毒体积与细胞数之比为1:100~1:25。
3.根据权利要求1所述的一种利用真核表达系统制备HIV-1gp120的方法，其特征在于：步骤F中纯化方法为Ni柱亲和层析法。
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