[发明专利]β‑1,4‑异木聚糖、其硫酸化衍生物及其制备方法和用途

说明书

技术领域

本发明涉及一种中草药多糖及其制备方法，更具体地说，涉及一种铁皮石斛β-1,4-异木聚糖、其硫酸化衍生物以及它们的制备方法及所述硫酸化衍生物在抗血管生成方面的应用。

背景技术

道家经典《道藏》曾把铁皮石斛列为“中华九大仙草之首”，主要分布在浙江、安徽、云南等地。它的干燥茎具有滋阴养胃，增强免疫力，调节血糖水平等的功效。早期研究表明，多糖是一种重要的活性物质，多糖的含量也间接反映药材品质。因此，对石斛多糖的定性研究不仅可以为石斛品种鉴别提供依据还可以规范中药市场。

前期研究主要集中在水提多糖，因为铁皮石斛多糖的分离纯化及结构解析仍然面临很多挑战，迄今为止从铁皮石斛中只获得少数水提均一多糖。然而，对铁皮石斛碱提多糖知之甚少。作为碱提多糖中重要的组成成分之一的木聚糖是一种重要的复杂多糖，不同来源的木聚糖之间也存在着很大的区别。因此，它的结构也可以作为品种鉴定的参考指标之一。更重要的是，功能性木聚糖衍生物作为新一代的生物制品具有广泛的药理活性。与其它衍生物相比，硫酸化多糖则具有更强的生物活性。硫酸化多糖具有多种生物活性，如抗凝、抗补体、抗肿瘤和抗血管生成等活性。

血管生成在机体中发挥着重要的作用。研究表明，血管生成不直接引发肿瘤，但是可以促进恶性肿瘤发展和转移。血管生成虽然有益于机体器官的生长和修复，但是也可以为肿瘤细胞的生长提供条件并引起恶性疾病和炎症。如今，越来越多的证据表明，抗血管生成的化合物也可以阻止肿瘤的发展。抗血管生成方面的研究很有可能改变临床抗肿瘤药物的现状，肿瘤患者也将受益于抗血管生成疗法。在大量生物活性筛选的基础上，出现越来越多抗血管生成化合物。研究发现，硫酸化多糖具有较强的抑制血管生成的活性。虽然一些硫酸化多糖具有良好的生物活性，但同时也表现出不可忽略的细胞毒性。因此，具有合适的取代度，无细胞毒性的抗血管生成硫酸化多糖有望被开发成为抗血管生成类抗肿瘤药物的候选药物，在肿瘤治疗候选药物上方面具有巨大的应用前景。

发明内容

本发明的目的在于提供一种无细胞毒性并且具有抗血管生成活性的药物。

一方面，本发明提供一种β-1,4-异木聚糖(下文中称为：S32)，其结构式如下：

其中，R_x为α-L-Araf-(1→4)-α-D-Glcp-(1→；β-D-Xylp-(1→；α-L-Araf-(1→，或β-D-Galp-(1→3)-α-L-Rhap-(1→，n＝3-42，并且优选地，n＝19-21。

其中，所述β-1,4-异木聚糖的尖峰分子量为：3.7×10⁴Da。

另一方面，本发明提供所述β-1,4-异木聚糖的制备方法，该方法包括以下步骤：

a.多糖提取：铁皮石斛干燥茎经脱脂后，用碱提取，经醇沉洗涤后得到粗多糖DOA；

b.多糖纯化：得到的粗多糖DOA经阴离子交换柱分离、去除淀粉后，经凝胶柱纯化得到S32。

具体地，所述方法包括以下步骤：

a.多糖提取：铁皮石斛干燥茎经95％乙醇浸泡脱脂，风干，粉碎后沸水反复提取10次。过滤后残渣用浓度为0.1-2M，优选的浓度值为1M的氢氧化钠溶液提取，滤液用盐酸中和后浓缩，透析，透析内液经离心，5倍体积的95％乙醇沉淀，离心后经无水乙醇和丙酮交替洗涤3次后干燥得到铁皮石斛碱提粗多糖DOA；

b.多糖纯化：取铁皮石斛碱提粗多糖，去离子水溶解，离心，上清液经DEAE Sepharose fast flow阴离子交换柱分离；采用硫酸-苯酚法检测，收集0.1M氯化钠洗脱组分DOA1；进一步采用α-淀粉酶除去DOA1中的淀粉得到DOA1a，产物进一步用Sephacryl ^TM S-300纯化得到S32。

对通过以上方法得到的β-1,4-异木聚糖进行结构鉴定：