[发明专利]一种不含卵黄的人精子冷冻保护液及保存方法

权利要求书

1.一种不含卵黄的人精子冷冻保护液，其特征在于，包括以下组分且在保存人精子时各组分的终浓度为：氯化钠90~110mmol/L、氯化钾5~6mmol/L、硫酸镁0.2~0.5mmol/L、氯化钙2~4mmol/L、磷酸二氢钠0.2~0.5mmol/L、碳酸氢钠28~35mmol/L、甘氨酸110~150mmol/L、4-羟乙基哌嗪乙磺酸18~25mmol/L、葡萄糖5~8mmol/L、蔗糖30~60mmol/L、乳酸钠12~15mmol/L、甘油50~100mL/L，余量为超纯水。

2.根据权利要求1所述的不含卵黄的人精子冷冻保护液，其特征在于，包括以下组分且在保存人精子时各组分的终浓度为：氯化钠100mmol/L、氯化钾5.365mmol/L、硫酸镁0.49mmol/L、氯化钙2.72mmol/L、磷酸二氢钠0.31mmol/L、碳酸氢钠30.95mmol/L、甘氨酸133.2mmol/L、4-羟乙基哌嗪乙磺酸20mmol/L、葡萄糖5.51mmol/L、蔗糖50mmol/L、乳酸钠12.86mmol/L、甘油70mL/L，余量为超纯水。

3.人精子冷冻保存方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）将权利要求1或2所述的精子冷冻保护液和精液混匀，当精液中精子浓度大于等于150×10⁶/mL时，精子冷冻保护液和精液按体积比为1:1混匀；当精液中精子浓度大于等于100×10⁶/mL而小于150×10⁶/mL时，精子冷冻保护液和精液按体积比为1:2混匀；当精液中精子浓度大于等于60×10⁶/mL而小于100×10⁶/mL时，精子冷冻保护液和精液按体积比为1:3混匀；

（2）将步骤（1）所得混合物在室温下平衡10~15min，然后按照分段降温方式静置15~20min；其中，分段降温方式为在-20℃静置5min，接着在-125~-130℃静置10min；

（3）将步骤（2）所得物转移到-196℃液氮中保存。

4.根据权利要求3所述的人精子冷冻保存方法，其特征在于，步骤（2）中，在室温下平衡10min。