[发明专利]一种不含卵黄的人精子冷冻保护液及保存方法

说明书

本发明公开了一种不含卵黄的人精子冷冻保护液及保存方法，其中，精子冷冻保护液包括以下组分且在保存人精子时各组分的终浓度为：氯化钠90～110mmol/L、氯化钾5～6mmol/L、硫酸镁0.2～0.5mmol/L、氯化钙2～4mmol/L、磷酸二氢钠0.2～0.5mmol/L、碳酸氢钠28～35mmol/L、甘氨酸110～150mmol/L、4‑羟乙基哌嗪乙磺酸18～25mmol/L、葡萄糖5～8mmol/L、蔗糖30～60mmol/L、乳酸钠12～15mmol/L、甘油50～100mL/L，余量为超纯水。该精子冷冻保护液不含卵黄，不会引起过敏反应，能对精子冷冻过程中的冷冻损伤具有良好的保护作用，并且对精子生理功能无明显的负面影响，冷冻后具有良好的前向运动精子复苏率。

技术领域

本发明属于人精子保存技术领域，具体涉及一种不含卵黄的人精子冷冻保护液及保存方法。

背景技术

精液冷冻技术是人类精子库保存精子，得以保持其生命力和受精能力的一项技术。冷冻技术中向精液样本中添加的冷冻保护剂是使精子在降温和低温储存过程中免受冷冻损伤的关键性物质。目前使用的冷冻保护剂中卵黄是主要的成分之一。但是，卵黄来源于鸡蛋，具备有生物源性。卵黄由卵黄颗粒、磷脂和蛋白等生物活性物质组成，难以通过过滤、高温或其它方法达到完全的除菌或灭菌。其中的蛋白质对于人体而言是一种异种蛋白，可能在使用中进入人体引起过敏性反应。再者溶液中混有卵黄颗粒增加了显微镜观察精子时背景存在杂质干扰，且不易去除。

发明内容

针对现有技术中的上述不足，本发明提供了一种不含卵黄的人精子冷冻保护液及保存方法，可有效解决现有的冷冻保护剂会引起不良反应，无法达到完全灭菌以及增加观察的干扰等问题。

为实现上述目的，本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：

一种不含卵黄的人精子冷冻保护液，包括以下组分且在保存人精子时各组分的终浓度为：氯化钠90～110mmol/L、氯化钾5～6mmol/L、硫酸镁0.2～0.5mmol/L、氯化钙2～4mmol/L、磷酸二氢钠0.2～0.5mmol/L、碳酸氢钠28～35mmol/L、甘氨酸110～150mmol/L、4-羟乙基哌嗪乙磺酸18～25mmol/L、葡萄糖5～8mmol/L、蔗糖30～60mmol/L、乳酸钠12～15mmol/L、甘油50～100mL/L，余量为超纯水。

进一步地，一种不含卵黄的人精子冷冻保护液，包括以下组分且在保存人精子时各组分的终浓度为：氯化钠100mmol/L、氯化钾5.365mmol/L、硫酸镁0.49mmol/L、氯化钙2.72mmol/L、磷酸二氢钠0.31mmol/L、碳酸氢钠30.95mmol/L、甘氨酸133.2mmol/L、4-羟乙基哌嗪乙磺酸20mmol/L、葡萄糖5.51mmol/L、蔗糖50mmol/L、乳酸钠12.86mmol/L、甘油70mL/L，余量为超纯水。

人精子冷冻保存方法，包括以下步骤：

(1)将上述精子冷冻保护液和精液按体积比为1:1～3混匀；

(2)将步骤(1)所得混合物在室温下平衡10～15min，然后按照分段降温方式静置15～20min；

(3)将步骤(2)所得物转移到-196℃液氮中保存。

进一步地，步骤(1)中精子冷冻保护液和精液按体积比为1:3。

进一步地，步骤(2)中，在室温下平衡10min。

进一步地，步骤(2)中分段降温方式为在-20℃静置5min，接着在-125～-130℃静置10min，使之尽快通过液体的冰晶形成期，进而不会对精子造成伤害。

本发明提供的一种不含卵黄的人精子冷冻保护液及保存方法，具有以下有益效果：