[发明专利]双膜法离体培养杨树和双色蜡蘑外生菌根真菌共生体系的方法

权利要求书

1.双膜法离体培养杨树和双色蜡蘑外生菌根真菌共生体系的方法，其特征在于包括以下步骤：

1）杨树插枝培养：杨树插枝在含有吲哚丁酸的MS培养基中培养5-7天，再转移到不含任何激素的MS培养基中培养直至杨树插枝底部形成2-3cm的根；

2）双色蜡蘑培养：将外生菌根真菌双色蜡蘑接种至覆盖在P5培养基上的赛璐玢薄膜上培养直至长出菌丝；

3）共生培养：将步骤1）得到的杨树插枝转移至覆盖在P20培养基上的赛璐玢薄膜上，再取步骤2）得到的带有双色蜡蘑的赛璐玢薄膜面朝下或朝上放在根上，用透气的胶带密封培养皿，用不透光材料遮盖根系部分，然后在24℃,16h光照，8h无光照的条件下培养1-3星期，即可得到共生体系。

2.如权利要求1所述的双膜法离体培养杨树和双色蜡蘑外生菌根真菌共生体系的方法，其特征在于所述的步骤1）中含有吲哚丁酸的MS培养基中含有：宏量元素50ml/l，微量元素100 ml/l，葡萄糖1.0g/l，维生素10 ml/l，IBA溶液2ml/l，琼脂粉10g/l，所述的IBA溶液浓度为1mg/ml，所述的宏量元素含有硫酸镁3.6mg/mL，硝酸钾38mg/mL，磷酸二氢钾3.4mg/mL，所述的微量元素含有硼酸62ug/ml，氯化钴0.25ug/ml，硫酸铜0.25ug/ml，EDTA钠盐373ug/ml，硫酸亚铁278ug/ml，硫酸锰169ug/ml，硫酸锌86ug/ml，所述的维生素含有肌醇10.0mg/mL，烟酸0.1mg/mL，吡哆醇0.1mg/mL，硫胺素1.0mg/mL。

3.如权利要求1所述的双膜法离体培养杨树和双色蜡蘑外生菌根真菌共生体系的方法，其特征在于所述的步骤2）中P5培养基含有：麦芽糖5g/l，酒石酸铵0.5g/l，KH₂PO₄ 1.0 g/l，MgSO₄·7H₂O 0.5 g/l，葡萄糖1.0 g/l，营养液1.0ml/l，维生素B1 1.0 ml/l。

4.如权利要求1所述的双膜法离体培养杨树和双色蜡蘑外生菌根真菌共生体系的方法，其特征在于所述的步骤1）中P20培养基中含有：酒石酸铵0.5 g/l，KH₂PO₄ 1.0 g/l，MgSO₄·7H₂O 0.5 g/l，葡萄糖1.0 g/l，营养液1.0ml/ml，维生素B1 1.0ml/l，MES钠盐1g/L，琼脂20g/L，用0.25mol/L的KOH溶液调PH至5.8。

5.如权利要求3或4所述的双膜法离体培养杨树和双色蜡蘑外生菌根真菌共生体系的方法，其特征在于所述的营养液含有铁离子6.0mg/ml，锌离子2.0mg/ml，铜离子0.6mg/ml，锰离子5.0mg/ml，硼酸8.0mg/ml。