[发明专利]一种微流控芯片荧光免疫快速检测试剂盒及其制备和检测方法

说明书

技术领域

本发明属于免疫检测领域，具体涉及一种微流控芯片荧光免疫快速检测试剂盒及其制备和检测方法。

背景技术

近年来微流控芯片 ( microfluidic chips) 技术发展迅速, 在医学、生命科学等领域的应用得到不断扩展。微流控芯片是指采用微细加工技术, 将微通道网络结构及其他功能元件集成在数平方厘米的基片上, 通过对微通道中的流体进行控制, 以实现进样、稀释、混合、反应、分离、检测等多种功能的微全分析系统, 具有微型化、集成化、分析速度快、试剂消耗少等显著优点。

免疫标记技术是以抗原抗体特异性反应为基本原理，采用荧光素、同位素或酶等示踪物质标记抗体(或抗原)进行抗原-抗体反应，通过对免疫复合物中的标记物的测定，达到对免疫反应进行检测的目的。

免疫标记技术按检测反应体系的物理状态分为均相免疫反应和非均相免疫反应。

非均相免疫反应是指将抗原或抗体固定在固相载体（微孔板或滤纸）表面, 通过特异性免疫反应, 将所需检测的抗体或抗原结合在固相表面, 继经清洗, 即可实现抗原抗体复合物与游离的抗原、抗体之间的物理分离。通常使用的免疫层析法、酶联免疫法、板式化学发光法均为非均相免疫分析方法。

“微流控芯片免疫分析抗体固定方法比较”（《中国医药生物技术》2015年 第1期 ）、“微流控芯片免疫分析技术及其研究进展”（《检验医学》2007第22卷第4期）等文献报道利用微流控芯片通道壁为固相载体来包被抗体（或抗原）的方法，就是一种简便的微流控芯片与微孔板免疫技术相结合的非均相免疫分析方法。

专利“双层微流控芯片器件及其在免疫检测中的用途”（CN 102749433）使用了微流控技术与传统的免疫标记技术（非均相）相结合。使用上下两个微流控芯片，分别通入抗原和抗体，通过抽真空，使抗原和抗体分别富集在聚酯膜上并发生免疫反应。该专利有以下不足：（1）所用的抗原和抗体试剂仍需分别保存在试剂瓶中（与传统方法相同），试验过程中通过抽真空驱动液体流动、混合、反应，不能使反应集成化；（2）所用固相载体—聚酯膜代替微孔板（或试纸），成本高；（3）聚酯膜孔径影响抗原或抗体的富集；（3）非均相反应是在固相载体的表面进行反应，反应不充分，灵敏度和重复性受到限制。

均相免疫反应是指抗原和抗体在同一介质（液态体系）中进行的免疫反应。目前应用较广的磁微粒化学发光免疫方法就是均相免疫反应，即将抗体（或抗原）偶联在包裹了磁微粒的微球上，在反应过程中将这种偶联了抗体（或抗原）的磁微球悬浮在反应液中，使得这种磁微球抗体（或抗原）与溶液中待测物质充分接触，使免疫反应更加充分、完全。在外加磁场作用下，将免疫反应形成的复合物与未结合的其它物质分离。该方法由于采用了均相反应体系，使反应的精密度和重复性进一步提高。但该技术需要匹配大型检测仪器，检测费用大，耗时时间长，试剂和样品用量大。

“基于磁珠技术的微流控生物芯片系统的研究”（《上海交通大学》 2007年 ）是将免疫磁珠置于微流控通道中，由于受流体流动速度以及抗原和抗体只有一过性接触的影响，抗原和抗体不能保证充分、彻底反应。

微流控技术、磁微粒免疫技术与荧光免疫技术相结合技术研究目前还没有更多的文献报道。

因此，研制一种方便、快捷、高通量、灵敏度高、集成化高、适合工业化生产的微流控芯片均（液）相荧光免疫快速检测试剂盒是目前亟待解决的问题。

发明内容

本发明的目的在于提供一种微流控芯片荧光免疫快速检测试剂盒，该试剂盒以荧光物质为标记物，以磁性微球为捕获物，试剂用量少，集成化高，所有试剂均事先固化于芯片中；标记荧光微球和捕获磁珠固化简便、易复溶、易悬浮；可在相对闭合的空间内进行抗原抗体反应，无交叉污染，不污染环境。具有高效率、高通量、高灵敏度、快速、灵敏、稳定等优点。

本发明的目的是这样实现的：一种微流控芯片荧光免疫快速检测试剂盒,其特征在于：该试剂盒含有微流控芯片，所述微流控芯片包括一条或多条检测单元，所述检测单元位于微流控芯片的半径轴上，以微流控芯片中心点发散排列，所述检测单元自芯片中心点向边缘依次排列有加样槽、荧光探针槽、反应检测槽和废液槽，以及相互连接的微通道；所述荧光探针槽底部固化有荧光探针，该荧光探针是聚苯乙烯荧光（Flu）微球偶联抗体（或抗原或二抗）的复合物；所述反应检测槽中固化有捕获磁珠微球，该捕获磁珠微球是聚苯乙烯磁珠微球偶联抗体（或抗原或二抗）的复合物。

所述微流控芯片只有加样槽通过加样孔与外界相通，其余槽均是封闭的。