[发明专利]一种肝素钠的提取方法

权利要求书

1.一种肝素钠的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)收集新鲜猪小肠黏膜，于0～4℃保存备用；

(2)向小肠黏膜中加入为其重量4～5倍的水，升温至60～65℃，并在升温的同时搅拌分散，保温20～30min，再降温至30～45℃；

(3)向步骤(2)所得的小肠黏膜溶液中加入0.4～0.8％小肠黏膜重量的复合蛋白酶，调节溶液pH值为8.5～9，于40～45℃下酶解3～4h，过滤，收集酶解液Ⅰ和滤渣；以滤渣为底物，重复上述酶解操作，离心，收集酶解液Ⅱ，将酶解液Ⅰ和酶解液Ⅱ合并；

(4)用2～3倍树脂重量的20％～25％氯化钠溶液浸泡树脂，并搅拌2～3h，再分别使用0.5～1.5倍树脂重量的10％氯化钠溶液和5％氯化钠溶液洗脱树脂，每次1～2h；

(5)向合并后的酶解液中加入氯化钠溶液，搅拌混合5～10min，于60～70℃保温10～20min，再加入步骤(4)中处理后的树脂，于室温下搅拌吸附4～6h，搅拌速度为50～100r/min，过滤，分别收集滤液和树脂；并向滤液中加入为其体积6％～8％的氯化钠溶液，再加入过量90％乙醇沉淀，收集并干燥析出物Ⅰ；其中，酶解液与树脂的体积重量比V:M＝12～15；氯化钠溶液体积占酶解液体积的1％～4％；所述氯化钠溶液浓度为0.5～1mol/L；

(6)向树脂中加入1～2倍树脂重量的氯化钠溶液洗脱2～3次，每次3～5h，合并洗脱液，再加入0.4％的胰蛋白酶酶解2～3h，然后等体积95％乙醇沉淀，收集并干燥析出物Ⅱ；

(7)将析出物Ⅰ和析出物Ⅱ混合，加水溶解，再分别加入0.1％混合物重量的过氧化氢和4％～8％混合物重量的单宁酸，搅拌混合，放置5～10min，过滤，然后向滤液中加入等体积的90％乙醇沉淀，收集并干燥析出物，得肝素钠纯品。

2.根据权利要求1所述的肝素钠的提取方法，其特征在于，步骤(3)中所述复合蛋白酶的重量为小肠黏膜重量的0.4％。

3.根据权利要求1或2所述的肝素钠的提取方法，其特征在于，步骤(3)中所述复合蛋白酶包括胰蛋白酶和木瓜蛋白酶，胰蛋白酶和木瓜蛋白酶的重量比为2:1。

4.根据权利要求1所述的肝素钠的提取方法，其特征在于，步骤(5)中所述氯化钠浓度为0.8mol/L，氯化钠溶液体积占酶解液体积的1.5％。

5.根据权利要求1所述的肝素钠的提取方法，其特征在于，步骤(5)中所述树脂为粒径为150～200目的D-254树脂或WD-1701树脂。

6.根据权利要求1所述的肝素钠的提取方法，其特征在于，步骤(6)中所述氯化钠溶液浓度为1.6mol/L。

7.根据权利要求1所述的肝素钠的提取方法，其特征在于，步骤(7)中所述单宁酸的重量为混合物重量的4％。