[发明专利]RGDF靶向的新型钌多吡啶配合物载体的制备和评价

权利要求书

1.一种具有靶向性的基因载体，Ru-CO-RGDF。

2.权利要求1所述基因载体Ru-CO-RGDF的制备方法，包括以下步骤：合成4’-甲基-2,2’-联吡啶-4-甲酸与H-R(Tos)-G-D(OBzl)-F-OBzl通过DCC/HoBt法缩合后，再经过强酸脱保护，最后与双(2,2’-联吡啶)二氯化钌缩合，即得。

3.一种基因递送系统，其特征在于，由基因载体Ru-CO-RGDF和抗肿瘤基因治疗药物survivin-siRNA制备而成。

4.权利要求3所述的基因递送系统，其特征在于，基因载体Ru-CO-RGDF和抗肿瘤基因治疗药物survivin-siRNA的重量比为1.66:1。

5.权利要求3所述的基因递送系统，为纳米结构。

6.权利要求3所述的基因递送系统的制备方法，包括以下步骤：基因载体Ru-CO-RGDF与鱼精蛋白在常温下混合，静置待用，取抗肿瘤基因survivin-siRNA与DNA在常温下混合，室温待用，将上述两者溶液混合后，即得Ru-CO-RGDF/survivin-siRNA。

7.权利要求3所述的基因递送系统的制备方法，其特征在于，Ru-CO-RGDF由以下方法制备而成：4’-甲基-(2,2’-联吡啶)-4-羧酸与H-Arg(Tos)-Gly-Asp(OBzl)-Phe-OBzl在THF与少量DMF中通过DDC/HOBt反应，然后再脱掉保护基团，最后与顺式-双(2,2'-联吡啶)二氯化钌在加热回流，氮气保护下反应8小时得到Ru-CO-RGDF。

8.权利要求3所述的基因递送系统的制备方法，其特征在于，Ru-CO-RGDF由以下方法制备而成:

1)Boc-Arg(Tos)-Gly-Asp(OBzl)-Phe-OBzl的合成

精氨酸和天冬氨酸主链用Boc保护氨基端，甘氨酸和苯并氨酸用OBzl保护羧基端，侧链用适宜的保护基(叔丁氧羰基)保护的L-氨基酸，液相法接肽，得到两个全保护的二肽:Boc-Arg(Tos)-Gly-OBzl和Boc-Asp(OBzl)-Phe-OBzl。分别用氢解方法脱去OBzl保护和酸解方法脱去Boc保护后，继续用液相法接肽，得到全保护四肽。在冰浴的条件下，用溶有HCl的乙酸乙酯溶液5ml溶解170mg Boc-Arg(Tos)-Gly-Asp(OBzl)-Phe-OBzl，搅拌反应，用TLC板监测反应。等反应结束后，抽气，将酸气抽干。即得H-Arg(Tos)-Gly-Asp(OBzl)-Phe-OBzl。

2)合成4’-甲基-(2,2’-联吡啶)-4-酰基-Arg(Tos)-Gly-Asp(OBzl)-Phe-OBzl

将28mg4’-甲基-(2,2’-联吡啶)-4-羧酸与117mg H-Arg(Tos)-Gly-Asp(OBzl)-Phe-OBzl用液相法接肽，制得124mg全保护的中间体4’甲基-(2,2’-联吡啶)-4-酰基-Arg(Tos)-Gly-Asp(OBzl)-Phe-OBzl。

3)合成4’-甲基-(2,2’-联吡啶)-4-酰基-RGDF

用三氟乙酸-三氟甲磺酸混合液(v:v＝3:1)于冰水浴中反应30分钟，加入冰乙醚终止反应后离心，用冰乙醚将产物洗至接近中性，脱去保护基，最终得到目标产物4’-甲基-(2,2’-联吡啶)-4-酰基-RGDF。

4)Ru-CO-RGDF的合成

顺式-双(2,2'-联吡啶)二氯化钌(48毫克，0.09毫摩尔)和混合物4'-甲基-2,2'-联吡啶-4-酰基-RGDF(56毫克，0.08毫摩尔)在乙醇(10mL)和水的混合物中于黑暗中和在氮气保护下回流进行8小时。将反应混合物通过旋转蒸发仪进行蒸发，后将残余物溶解在5mL水中，向其中加入2毫升饱和NH4PF6，会形成砖红色沉淀，离心后收集沉淀。通过过滤，用水洗涤，并真空干燥后得到一种红橙色粉末。将粉末溶解在2毫升甲醇中，溶液进行过滤，将滤液在真空下蒸发，并将残余物重结晶在甲醇和乙醚的混合溶剂中，并通过C18进行简单分纯，得到50毫克的复杂的Ru-CO-RGDF的六氟磷酸盐,

将终产物溶于较少的乙腈中，加入丙酮溶解的四丁基氯化铵溶液，有砖红色沉淀析出，离心后收集沉淀，干燥，得到氯代的终产物Ru-CO-RGDF。