[发明专利]一种片段法固相合成醋酸加尼瑞克的方法

权利要求书

1.一种片段法固相合成醋酸加尼瑞克的方法，其特征在于，包括如下步骤：

(a)以氨基树脂为固相载体，以2-5倍摩尔量的投料比，加入相应的Fmoc保护氨基酸进行偶联反应，每一个偶联反应均是在缩合剂的存在下进行的固相接肽反应，反应完毕后用脱保护试剂脱除Fmoc，再与下一个Fmoc保护氨基酸进行偶联反应；依次分别与Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Pro-OH、Fmoc-Lys(X)-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-D-Lys(X)-OH偶联反应，制备得到Fmoc-D-Lys(X)-Leu-Lys(X)-Pro-Ala-氨基树脂；所述X为Mtt或Mmt；加入TFE：DCM为1:4的比例配制200ml混合溶液反应30min，处理2次，抽掉反应液，用120ml然后用DMF、DCM、甲醇分别洗涤3次，真空干燥，脱除侧链保护基X，加入DMF和三乙胺，冰浴下缓慢滴加含有乙氨基乙亚胺基甲磺酸的DMF溶液，搅拌反应24h，抽掉反应液，用DMF、DCM分别洗涤6次，再用甲醇收缩3次，真空干燥，得到醋酸加尼瑞克片段A[6-10]肽树脂：Fmoc-D-HArg(Et)2-Leu-HArg(Et)2-Pro-Ala-氨基树脂；

(b)采用CTC树脂为固相载体按照醋酸加尼瑞克肽序依次偶联1～5位侧链保护氨基酸，脱除最后一个Fmoc保护基，进行N端乙酰化反应，肽树脂经裂解后，得到醋酸加尼瑞克中间体片段B[1-5]：Ac-D-Nal-D-Cpa-D-Pal-Ser(tBu)-Tyr(tBu)- OH，具体为：以CTC树脂为固相载体，Fmoc-Tyr(tBu)-OH与之偶联得到Fmoc-Tyr(tBu)-CTC树脂，脱除Fmoc保护后，以2～3倍摩尔量的的投料比依次加入Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-D-Pal-OH、Fmoc-D-Cpa-OH、Fmoc-D-Nal-OH保护氨基酸进行偶联反应，每一个偶联反应均是在缩合剂的存在下进行的固相接肽反应，每一步偶联反应均以Kaiser试剂检测反应终点，反应完毕后用脱保护试剂脱除Fmoc，再与下一个Fmoc保护氨基酸进行偶联反应；重复操作直至偶联完成1～5位氨基酸；脱除Fmoc保护基团，加入乙酰化试剂反应2～3h，乙酰化反应结束后所得肽树脂经裂解得到醋酸加尼瑞克中间体片段B[1-5]；

(c)醋酸加尼瑞克片段A[6-10]肽树脂脱除Fmoc保护基后与中间体片段B[1-5]在缩合剂存在下发生接肽反应，得到醋酸加尼瑞克肽树脂Ac-D-Nal-D-Cpa-D-Pal-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-D-HArg(Et)2-Leu-HArg(Et)2-Pro-Ala-氨基树脂；

(d)肽树脂经裂解试剂裂解、纯化、转盐和冻干后获得醋酸加尼瑞克纯品。

2.根据权利要求1所述的片段法固相合成醋酸加尼瑞克的制备方法，其特征在于，步骤(a)中所述氨基树脂为Rink Amide resin、Rink Amide AM resin或Rink Amide MBHAresin中的一种。

3.根据权利要求1所述的片段法固相合成醋酸加尼瑞克的制备方法，其特征在于，步骤(a)中所述脱保护基X的试剂为TFE/DCM、TFA/DCM、AcOH/TFE/DCM、HFIP/DCM组合中的一种。

4.根据权利要求1所述的片段法固相合成醋酸加尼瑞克的制备方法，其特征在于，步骤(b)中肽树脂裂解所用的试剂组合为TFE/DCM、TFA/DCM、AcOH/TFE/DCM、HFIP/DCM中的一种。

5.根据权利要求1所述的片段法固相合成醋酸加尼瑞克的制备方法，其特征在于，所述脱除Fmoc保护基所用的试剂为体积百分比为20-25％哌啶的DMF溶液；偶联反应中所用的缩合剂为以下组合DIC/HOBT、DIC/HOAT、HBTU/HOBT/DIPEA、HATU/HOAT/DIPEA中的一种。

6.根据权利要求1所述的片段法固相合成醋酸加尼瑞克的制备方法，其特征在于，步骤(d)中所述肽树脂裂解试剂为加入体积比1～20％清除剂的TFA溶液，所述清除剂为苯甲醚、苯甲硫醚、乙二硫醇、巯基乙醇、苯酚、水和三异丙基硅烷中的一种或几种。