[发明专利]一种片段法固相合成醋酸加尼瑞克的方法

说明书

本发明属于多肽合成领域，涉及一种片段法固相合成醋酸加尼瑞克的方法。本发明首先采用固相法合成醋酸加尼瑞克的片段A[6‑10]肽树脂和中间体片段B[1‑5]；再将中间体片段B[1‑5]连接到肽树脂A[6‑10]上，裂解得到醋酸加尼瑞克粗肽；最后纯化得到醋酸加尼瑞克精肽。此技术方案可以大大缩短合成周期，提高粗肽纯度达到93％以上，降低了纯化难度和生产成本，提高产品总收率达到77％以上，进一步降低了生产成本，利于工业大规模生产。

技术领域

本发明涉及多肽合成领域，特别涉及一种片段法固相合成醋酸加尼瑞克的方法。

技术背景

醋酸加尼瑞克注射液(商品名：)，由默沙东公司(在美国和加拿大被称为默克)研发、生产，2013年经中国国家食品药品监督管理总局批准在中国上市，用于预防过早出现促黄体激素(LH)峰。不孕症在全世界的发病率达到9％，在体外受精与胚胎移植过程控制超排卵方案(COH)中使用促性腺激素释放激素(GnRH)激动剂调节已被常规采用。醋酸加尼瑞克注射液为第三代GnRH拮抗剂，能通过与垂体前叶的GnRH受体的竞争性结合，快速而可逆地抑制体内促卵泡激素(FSH)和促黄体激素(LH)的释放。醋酸加尼瑞克注射液为预防接受辅助生殖技术(ART)控制性超排卵(COH)方案的不孕症患者过早出现促黄体激素(LH)峰提供了最新的药物选择。

活性成分醋酸加尼瑞克(INN)是一种合成十肽，对天然生成的促性腺激素释放激素(GnRH)具有高的拮抗活性，是通过替代天然GnRH的第l、2、3、6、8、10位点上的氨基酸而形成的十肽化合物，氨基酸序列为：

Ac-D-Nal-D-Cpa-D-Pal-Ser-Tyr-D-HArg(Et₂)-Leu-HArg(Et₂)-Pro-D-Ala-NH₂

结构式如下：

目前醋酸加尼瑞克的合成方法主要有传统Boc固相合成法和Fmoc固相合成法，US4801577、US5212288、US5767082公开的方法为Boc固相合成方法，该方法工艺落后、成本高、收率低，且需要使用HF进行裂解，对环境污染极大，不利于生产放大；CN102584945A公开的方法为Fmoc固相合成法，该方法使用Fmoc-HArg(Et)₂-OH和Fmoc-D-HArg(Et)₂-OH为原料，完成氨基酸偶联后去保护，在进行乙酰化反应，得到醋酸加尼瑞克肽树脂，裂解纯化后得醋酸加尼瑞克；CN104017058A、CN104231055A公开的方法为Fmoc固相合成法，分别使用不同的侧链保护基保护的Fmoc-Lys(Dde)-OH、Fmoc-Lys(Alloc)-OH和Fmoc-D-Lys(Dde)-OH、Fmoc-D-Lys(Alloc)-OH代替Fmoc-HArg(Et)₂-OH和Fmoc-D-HArg(Et)₂-OH，在氨基酸偶联结束后脱除Fmoc保护基，然后N端进行乙酰化反应，在对赖氨酸和D-赖氨酸的侧链进行修饰得到醋酸加尼瑞克肽树脂，形成Et修饰的胍基，裂解、纯化处理后可得醋酸加尼瑞克；CN104844694A提出在采用Fmoc-Lys(Boc)-OH和Fmoc-D-Lys(Boc)-OH分别替代Fmoc-HArg(Et)₂-OH和Fmoc-D-HArg(Et)₂-OH，偶联结束后裂解得到醋酸加尼瑞克前体，在以水代替有机溶剂作为反应溶剂对醋酸加尼瑞克前体进行修饰，得到醋酸加尼瑞克粗肽，纯化后得到醋酸加尼瑞克。

以上专利中的Boc固相合成策略要用到剧毒的HF，大批量生产受到限制，制约产业化放大；Fmoc固相合成策略在合成肽链的过程中均采用逐个氨基酸进行偶联的方法，合成周期长，线性粗肽纯度低。为此，本发明人对醋酸加尼瑞克的合成方法进行了研究，从而得到本发明的技术方案。

发明内容