[发明专利]皱纹盘鲍硫氧还蛋白过氧化酶及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种编码皱纹盘鲍硫氧还蛋白过氧化酶的基因，其特征在于，含有SEQ ID NO.1所述的碱基序列或者含有编码如下蛋白质(a)或(b)的基因：

(a)由SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列组成的蛋白质；

(b)在(a)限定的氨基酸序列中经过取代、缺失或添加一个或几个氨基酸且具有硫氧还蛋白过氧化酶活性的由(a)衍生的蛋白质。

2.根据权利要求1所述的基因，其特征在于，用于所述基因扩增的引物如SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示。

3.一种皱纹盘鲍硫氧还蛋白过氧化酶，其特征在于，含有权利要求1所述的编码超氧化物歧化酶的基因所编码。

4.一种表达皱纹盘鲍硫氧还蛋白过氧化酶基因的载体，其特征在于，所述载体为含有权利要求1所述的硫氧还蛋白过氧化酶基因、AOX1启动子和终止子序列、多克隆位点以及筛选标志的毕赤酵母表达载体，所述毕赤酵母表达载体优选为pPIC9K。

5.根据权利要求4所述的载体，其特征在于，所述硫氧还蛋白过氧化酶基因位于毕赤酵母表达载体pPIC9K的多克隆位点处SnaBⅠ和NotⅠ限制性内切酶酶切位点之间。

6.根据权利要求4或5所述的载体，其特征在于，所述筛选标志为6×His-tag标签。

7.一种皱纹盘鲍硫氧还蛋白过氧化酶制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)构建含有编码皱纹盘鲍硫氧还蛋白过氧化酶的基因的重组表达载体；

(2)将步骤(1)所得重组表达载体导入宿主细胞，并将宿主细胞进行诱导表达，获得可表达皱纹盘鲍硫氧还蛋白过氧化酶的基因工程菌菌株；

(3)发酵培养已得到的基因工程菌菌株并进行诱导表达，获得表达产物；

(4)分离纯化步骤(3)所得的表达产物，获得重组蛋白，皱纹盘鲍硫氧还蛋白过氧化酶；

其中，步骤(1)中所述编码皱纹盘鲍硫氧还蛋白过氧化酶的基因，含有SEQ ID NO.1所述的碱基序列或者含有编码如下蛋白质(a)或(b)的基因：

(a)由SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列组成的蛋白质；

(b)在(a)限定的氨基酸序列中经过取代、缺失或添加一个或几个氨基酸且具有硫氧还蛋白过氧化酶活性的由(a)衍生的蛋白质。

8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，所述表达载体为毕赤酵母表达载体，优选为pPIC9K。

9.根据权利要求7或8所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，所述宿主细胞为毕赤酵母GS115菌株。

10.权利要求3所述的皱纹盘鲍硫氧还蛋白过氧化酶在食品添加剂、药物制备领域、保健品领域或者化妆品领域中的应用。

11.根据权利要求10所述的应用，其特征在于，所述食品添加剂为动物饲料添加剂，所述皱纹盘鲍硫氧还蛋白过氧化酶和动物血液的溶血率小于10％。

12.根据权利要求10所述的应用，其特征在于，所述皱纹盘鲍硫氧还蛋白过氧化酶能够保护和修复过氧化氢引起的细胞损伤。