[发明专利]一种基于单个量子点的用于检测DNA甲基转移酶的纳米传感器

权利要求书

1.一种基于单量子点的纳米传感器，其特征在于，所述纳米传感器包括：

3'末端生物素化的发夹检测探针，所述检测探针5'末端标记荧光团花菁5(Cy5)，3'末端还标记有猝灭基团黑洞猝灭剂(BHQ2)，茎区包含靶DNA甲基转移酶的识别序列5'-GATC-3'；

表面包被链霉亲和素的量子点；

所述探针通过链霉亲和素-生物素相互作用连接到链霉亲和素修饰的量子点表面上，形成量子点/探针/花菁5/黑洞猝灭剂复合物；

所述纳米传感器还包括甲基化特异性核酸内切酶DpnI。

2.如权利要求1所述的基于单量子点的纳米传感器，其特征在于，所述发夹检测探针长度为36nt，所述发夹检测探针的碱基序列为：5'-black hole quencher 2(BHQ2)-ACA GTG ATC ATT GTT TTC AAT GAT CAC TGT-Cy5-TTT TTT-Biotin-3'。

3.如权利要求1所述的基于单量子点的纳米传感器，其特征在于，所述量子点为605QDs。

4.如权利要求1所述的基于单量子点的纳米传感器，其特征在于，所述纳米传感器还包括S-腺苷甲硫氨酸和甲基化特异性核酸内切酶反应缓冲溶液。

5.如权利要求4所述的基于单量子点的纳米传感器，其特征在于，所述甲基化特异性核酸内切酶反应缓冲溶液组成为：50毫摩尔每升的醋酸钾，20毫摩尔每升的三羟甲基氨基甲烷-醋酸，10毫摩尔每升的醋酸镁，100微克每毫升的牛血清白蛋白，pH 7.9。

6.权利要求1-5任一项所述纳米传感器用于检测DNA甲基转移酶的方法，其特征在于，方法如下：

(1)将待测样品加入所述生物素化的发夹检测探针溶液中进行反应，反应结束后进行高温失活；

(2)向步骤(1)中加入表面包被链霉亲和素的量子点进行孵育反应；

(3)采用全内角反射荧光技术(TIRF)的单分子成像系统对Cy5的荧光信号进行检测，以定量检测待测样品中的DNA甲基转移酶。

7.如权利要求6所述的检测方法，其特征在于，所述步骤(1)中反应温度为30-40℃，优选为37℃，反应时间为1h；高温失活反应温度为70-90℃(最佳为80℃)，反应时间为20分钟。

8.如权利要求7所述的检测方法，其特征在于，所述步骤(1)中反应温度为37℃；高温失活反应温度为80℃。

9.如权利要求6所述的检测方法，其特征在于，所述步骤(2)中孵育反应温度为室温，反应时间为10min。

10.权利要求1-5任一项所述纳米传感器和/或权利要求6-9任一项所述检测方法在检测DNA甲基转移酶活性和/或筛选DNA甲基转移酶抑制剂中的应用。