[发明专利]一种判别猕猴桃溃疡病抗性种质的方法

权利要求书

1.一种判别猕猴桃溃疡病抗性种质的方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）样品采集：于猕猴桃休眠期采集落叶后的猕猴桃一年生枝条，截取中间部分约30cm长，芽眼饱满的枝条，每个品种或种类取5个枝条，设无菌水处理为对照；

（2）病原菌培养：从保存的固体培养基平板上挑取单克隆，加入50 mL液体LB培养基，25℃，220rpm，震荡培养48h，4000rpm离心获得细菌沉淀，使用无菌水将病原菌悬浮液稀释到1×10⁹ cfu/ml；

（3）样品接菌：样品取回实验室后，使用自来水将枝条冲洗干净，晾干，然后使用75%酒精对枝条表面进行快速消毒，时间20s；再用无菌水迅速冲洗干净后，晾干，使用消毒后的5mm打孔器在枝条中部位置打孔，打孔深度深入木质部，用枪头吸取10 μl菌液注入孔内，放置15min使菌液完全渗入枝条伤口内；

（4）枝条低温培养：取一消毒后的40cm长芽苗盘，在上层沥水盘内铺两张无菌滤纸，在底层托盘内加入无菌水，加水高度至与上层沥水盘底部齐平，不要没过滤纸，使滤纸可以吸取水分保持湿度；将接菌后的枝条伤口朝上，摆放于滤纸上，每个枝条的摆放方向一致，当芽苗盘摆满一层后，上面覆盖另外两张无菌滤纸，并喷无菌水使其浸透为止；最后将要培养的芽苗盘至于无菌气候室内，控制温度10℃以下，每3天检查一次，如果发现滤纸部分变干则及时喷淋无菌水保湿，低温培养时间为35天；

（5）提高培养温度：低温培养35天后，提高培养温度到20℃，继续培养15天；

（6）抗性种质鉴别：枝条接菌培养50天后，观察枝条剪口是否形成愈伤组织或枝条是否萌芽，如果存在这两种现象的任何一种或同时存在，则判定其为抗性种质。