[发明专利]一种毛叶山桐子的组织培养育苗方法

权利要求书

1.一种毛叶山桐子的组织培养育苗方法，其特征在于，包括：

步骤1：将培养基注入玻璃瓶中，经高温高压消毒待用；

步骤2：采用优良野生或驯化单株的腋芽茎段为外植体，经乙醇-纳米银溶液消毒，用无菌水冲洗4-5次；

步骤3：无菌条件下，将消毒的外植体接种在含有抗褐变成分的启动培养基中，将其置于8℃低温暗培养7天，然后转为温度23℃，日光为光源、光照强度为1500-20001x下，每日照光10小时，湿度为60％，培养30天，分化长成单芽苗；

步骤4：将长成的所述单芽苗，剪切成带有隐芽的小段，接种于注入增殖培养基的所述玻璃瓶中，进行增殖培养，不断增殖，得到试管芽苗；

步骤5：将培养的所述试管芽苗，对基部剪切去愈伤组织，接种于消毒的注入壮苗培养基的玻璃瓶中，进行壮苗培养30-35天；

步骤6：将试管壮苗，去掉基部愈伤组织和部分叶片，留3-5片叶片，接种于消毒的注入生根培养基的玻璃瓶中，进行生根培养10-15天；

步骤7：将生长的带有完整根的小苗，取出清洗，移栽到含有草炭和花生壳粉的基质中，浇透水，保持温度25-28℃，相对湿度80％以上，前10天遮光70％，后逐渐见光，20天后生根成活，35-45天后，全光照。

2.根据权利要求1所述的一种毛叶山桐子的组织培养育苗方法，其特征在于，所述步骤1具体包括：

将培养基配好调节pH值，加热溶解后分装注入玻璃瓶中，经115℃高压消毒15min后凝固待用。

3.根据权利要求1所述的一种毛叶山桐子的组织培养育苗方法，其特征在于，所述步骤2具体包括：

采用优良野生或驯化单株的腋芽茎段为外植体，经0.5％乙醇-纳米银溶液消毒15min，用无菌水冲洗4-5次放于无菌0.1％PVP水中保存待用。

4.根据权利要求1所述的一种毛叶山桐子的组织培养育苗方法，其特征在于，所述步骤3具体包括：

无菌条件下，将消毒的外植体用手术刀斜切成带有隐芽的1cm-2cm长茎段。接种在步骤1的含有抗褐变成分的启动培养基中，将其置于8℃低温暗培养7天，然后转为温度23℃-25℃，日光为光源、光照强度为1500-20001x下，每日照光10小时，湿度为60％，培养30天，在茎段隐芽出分化长成单芽苗。

5.根据权利要求1所述的一种毛叶山桐子的组织培养育苗方法，其特征在于，所述步骤7具体包括：

将步骤6中生长的带有完整根的小苗，取出清洗，移栽到含有体积比为：草炭∶花生壳粉＝1∶1的基质中，喷施多菌灵后浇透水，保持温度25-28℃，相对湿度80％以上，前10天遮光70％，后逐渐见光，20天后生根成活，35-45天后，全光照。

6.根据权利要求1所述的一种毛叶山桐子的组织培养育苗方法，其特征在于，所述培养基成分配比包括：

硝酸钾80，抗坏血酸2.0，硝酸钙287.0，硫酸镁738.0，硫酸钠53.0，氯化钾65.0，磷酸二氢钠19.1，盐酸硫胺素0.2，盐酸吡哆素0.1，肌醇100，烟酸1.0，甘氨酸3.0，蔗糖20000，硫酸锰6.6，硫酸锌2.7，碘化钾0.75，氯化钴0.025，硼酸1.5，钼酸钠0.025，EDTA-铁30，卡拉胶6.5g；其中，pH值为5.7，配比单位为mg/L。

7.根据权利要求6所述的一种毛叶山桐子的组织培养育苗方法，其特征在于，所述步骤3中含有抗褐变成分的启动培养基，还包括：

所述培养基中添加TDZ 0.02-0.1mg/L、6-BA 0.5-1.0mg/L和α-NAA 0.05-0.15mg/L。

8.根据权利要求6所述的一种毛叶山桐子的组织培养育苗方法，其特征在于，所述步骤4中的增殖培养基，还包括：

所述培养基添加TDZ 0.02-0.1mg/L、6-BA 0.8-1.5mg/L和α-NAA 0.05-0.15mg/L。

9.根据权利要求6所述的一种毛叶山桐子的组织培养育苗方法，其特征在于，所述步骤5中的壮苗培养基，还包括：

所述培养基添加TDZ 0.02-0.05mg/L、6-BA 0.8-1.5mg/L和α-NAA 0.1-0.5mg/L。

10.根据权利要求6所述的一种毛叶山桐子的组织培养育苗方法，其特征在于，所述步骤6中的生根培养基，还包括：

所述培养基添加α-NAA 0.1-0.3mg/L和IAA 0.3-0.9mg/L。