[发明专利]一种基于光散射测量的细胞周期检测方法

权利要求书

1.一种基于光散射测量的细胞周期检测方法，其特征在于，采用各不同细胞周期的细胞样品分别制成具有指定浓度的对应各不同细胞周期的样品细胞悬液，利用广角光散射仪分别进行散射光强度测量，得到各个细胞周期的样品细胞悬液各自对应的散射光强度分布曲线；然后针对待测细胞样本，制成具有同样指定浓度的待测细胞悬液，在相同测量条件下利用广角光散射仪进行散射光强度测量，得到待测细胞悬液的散射光强度分布曲线，并分别与各个不同细胞周期的样品细胞悬液各自对应的散射光强度分布曲线进行对比，确定与待测细胞悬液的散射光强度分布曲线相匹配的一个细胞周期的样品细胞悬液，将该细胞周期判定为待测细胞样本的细胞周期；具体包括下述步骤：

A）预先确定检测所用细胞悬液的指定浓度；该步骤具体为，利用任一细胞周期的细胞样品分别制成10⁶个细胞/mL、2×10⁵个细胞/mL、10⁵个细胞/mL和5×10⁴个细胞/mL这四种浓度的细胞悬液并装入玻璃试管内，分别摇匀后，利用广角光散射仪分别测量该四种浓度的细胞悬液在90°散射角上的散射光强度，根据测量结果，选择散射光强度最大的一种细胞悬液的浓度作为检测所用细胞悬液的指定浓度；

B）采用G1期、S期、G2期和M期的细胞样品，分别制成具有指定浓度的对应G1期、S期、G2期和M期的样品细胞悬液并装入玻璃试管内，分别摇匀后，在37℃温度条件下，利用广角光散射仪分别测量每个细胞周期的样品细胞悬液在0°~180°散射角范围内每间隔5°上的散射光强度，根据测量结果，得到G1期、S期、G2期和M期的样品细胞悬液各自对应的散射光强度分布曲线；该步骤具体为：

b1）采用G1期、S期、G2期和M期的细胞样品，分别制成具有指定浓度的对应G1期、S期、G2期和M期的样品细胞悬液，并装入玻璃试管内；

b2）分别将装入玻璃试管内的G1期、S期、G2期和M期的样品细胞悬液摇匀后，在37℃温度条件下，利用广角光散射仪分别测量每个细胞周期的样品细胞悬液在0°~180°散射角范围内每间隔5°上的散射光强度，得到各不同细胞周期的样品细胞悬液各自对应的散射光强度分布曲线数据，并加以记录；

b3）重复执行步骤b2）5~10次，针对每个细胞周期的样品细胞悬液在每一个散射角度上各次测量所得的散射光强度值，剔除其中离均差率的绝对值大于10%的散射光强度值，再将该散射角度上其它次测量所得的散射光强度值求平均，得到相应细胞周期的样品细胞悬液在相应散射角度上的散射光强度平均值，从而分别得到相应细胞周期的样品细胞悬液在在0°~180°散射角范围内每间隔5°上的散射光强度平均值，并进行曲线数据拟合，再对拟合所得的散射光强度分布曲线数据进行平滑滤波处理，得到相应细胞周期的样品细胞悬液对应的散射光强度分布曲线；由此分别得到G1期、S期、G2期和M期的样品细胞悬液各自对应的散射光强度分布曲线；

C）针对待测细胞样本，制成具有同样指定浓度的待测细胞悬液，并装入玻璃试管内，分别摇匀后，在37℃温度条件下，利用广角光散射仪测量待测细胞悬液在0°~180°散射角范围内每间隔5°上的散射光强度，根据测量结果，得到待测细胞悬液的散射光强度分布曲线；该步骤具体为：

c1）采用待测细胞样本，制成具有指定浓度的待测细胞悬液，并装入玻璃试管内；

c2）将装入玻璃试管内的待测细胞悬液摇匀后，在37℃温度条件下，利用广角光散射仪测量待测细胞悬液在0°~180°散射角范围内每间隔5°上的散射光强度，得到待测细胞悬液的散射光强度分布曲线数据，并加以记录；

c3）重复执行步骤c2）5~10次，针对待测细胞悬液在每一个散射角度上各次测量所得的散射光强度值，剔除其中离均差率的绝对值大于10%的散射光强度值，再将该散射角度上其它次测量所得的散射光强度值求平均，得到待测细胞悬液在相应散射角度上的散射光强度平均值，从而分别得到待测细胞悬液在0°~180°散射角范围内每间隔5°上的散射光强度平均值，并进行曲线数据拟合，再对拟合所得的散射光强度分布曲线数据进行平滑滤波处理，得到待测细胞悬液的散射光强度分布曲线；

D）将待测细胞悬液的散射光强度分布曲线分别与各个不同细胞周期的样品细胞悬液各自对应的散射光强度分布曲线进行对比，确定与待测细胞悬液的散射光强度分布曲线相匹配的一个细胞周期的样品细胞悬液，将该细胞周期判定为待测细胞样本的细胞周期；该步骤具体为：

d1）从0°~180°散射角范围中，划分出前向散射角区间、侧向散射角区间和后向散射角区间，其中，前向散射角区间为0°~20°散射角范围，侧向散射角区间为80°~100°散射角范围，后向散射角区间为160°~180°散射角范围；

d2）根据G1期、S期、G2期和M期的样品细胞悬液各自对应的散射光强度分布曲线，分别统计得到G1期、S期、G2期和M期的样品细胞悬液各自在前向散射角区间、侧向散射角区间和后向散射角区间的散射光强分布直方图；

d3）根据待测细胞悬液的散射光强度分布曲线，统计得到待测细胞悬液在前向散射角区间、侧向散射角区间和后向散射角区间的散射光强分布直方图；

d4）将待测细胞悬液在前向散射角区间、侧向散射角区间和后向散射角区间的散射光强分布直方图分别与G1期、S期、G2期和M期的样品细胞悬液各自在前向散射角区间、侧向散射角区间和后向散射角区间的散射光强分布直方图进行对比，确定与待测细胞悬液的散射光强分布直方图相匹配的一个细胞周期的样品细胞悬液，将该细胞周期判定为待测细胞样本的细胞周期。