[发明专利]一种基于光散射测量的细胞周期检测方法

说明书

本发明提供了一种基于光散射测量的细胞周期检测方法，能够借助散射光强度分布曲线真实反映生物细胞在细胞周期过程中各个阶段G1期、S期、G2期和M期的变化，并将这种差异作为散射光强法测定细胞周期的主要参数，根据不同周期细胞在不同角度的光散射特性差异可以很方便直观的判断出待测细胞处于哪个周期，从而能够准确地对生物细胞的生长行为和周期进行判断和描述，其操作流程简单，测量速度快，也不需要对细胞进行染色处理，对细胞没有损伤，测量过后的细胞样品还可以重复利用，有利于在生物医学研究过程中推广应用，也可用于在体检测，并且能够用于多种不同种类的生物细胞、病毒细胞的细胞周期对比分析和相关研究，具有很好的技术应用前景。

技术领域

本发明涉及生物检测技术领域，尤其涉及细胞检测技术，具体涉及一种基于光散射测量的细胞周期检测方法。

背景技术

细胞周期是指细胞从一次分裂完成开始到下一次分裂结束所经历的全过程，分为间期与分裂期两个阶段。其中，间期又分为三期、即DNA合成前期（G1期）、DNA合成期（S期）与DNA合成后期（G2期）。分裂期（M期）分为前期、中期、后期和末期。

癌症是一种细胞周期疾病，细胞周期是抗肿瘤药物分类的主要依据。细胞周期理论为研制抗肿瘤药物提供新的靶点。精准的抗肿瘤药物可以直接针对不同周期的癌细胞，直接灭杀，从而达到治疗的目的。但是能够精确杀灭癌细胞的前提是能够对对应细胞的周期进行检测。因此，利用相关技术对不同周期的癌细胞进行分析测量对癌症的治疗诊断具有重要意义。

目前较为常用的细胞周期检测方法主要是流式细胞术，其方法是在对细胞染色的基础上，通过对单个细胞内的染色体含量进行检测，从而判断细胞所处的周期，但是该方法的检测流程较为复杂，检测速度慢，并需要依赖于细胞染色，对细胞有损伤，且无法准确分辨G2期和M期的细胞，也无法对群体细胞的细胞周期进行检测。

发明内容

针对现有技术中存在的上述不足，本发明的目的在于提供一种基于光散射测量的细胞周期检测方法，利用光散射特性简单、快速地实现细胞周期的检测，以解决现有的细胞周期检测技术中需要染色损伤细胞、流程复杂、检测速度慢等问题。

为解决上述技术问题，本发明采用了如下的技术方案：

一种基于光散射测量的细胞周期检测方法，采用各不同细胞周期的细胞样品分别制成具有指定浓度的对应各不同细胞周期的样品细胞悬液，利用广角光散射仪分别进行散射光强度测量，得到各个细胞周期的样品细胞悬液各自对应的散射光强度分布曲线；然后针对待测细胞样本，制成具有同样指定浓度的待测细胞悬液，在相同测量条件下利用广角光散射仪进行散射光强度测量，得到待测细胞悬液的散射光强度分布曲线，并分别与各个不同细胞周期的样品细胞悬液各自对应的散射光强度分布曲线进行对比，确定与待测细胞悬液的散射光强度分布曲线相匹配的一个细胞周期的样品细胞悬液，将该细胞周期判定为待测细胞样本的细胞周期。

上述基于光散射测量的细胞周期检测方法中，具体而言，具体包括下述步骤：

A）预先确定检测所用细胞悬液的指定浓度；

B）采用G1期、S期、G2期和M期的细胞样品，分别制成具有指定浓度的对应G1期、S期、G2期和M期的样品细胞悬液并装入玻璃试管内，分别摇匀后，在37℃温度条件下，利用广角光散射仪分别测量每个细胞周期的样品细胞悬液在0°~180°散射角范围内每间隔5°上的散射光强度，根据测量结果，得到G1期、S期、G2期和M期的样品细胞悬液各自对应的散射光强度分布曲线；

C）针对待测细胞样本，制成具有同样指定浓度的待测细胞悬液，并装入玻璃试管内，分别摇匀后，在37℃温度条件下，利用广角光散射仪测量待测细胞悬液在0°~180°散射角范围内每间隔5°上的散射光强度，根据测量结果，得到待测细胞悬液的散射光强度分布曲线；